c-jun對基礎(chǔ)狀態(tài)下仔豬睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、睪丸間質(zhì)細(xì)胞是產(chǎn)生睪酮的主要分泌細(xì)胞，它利用多種酶將膽固醇逐步合成睪酮。其睪酮分泌作用受促性腺激素、生長因子等多種因素的調(diào)控，大量研究表明，這些因素實(shí)際上是通過調(diào)控與之有關(guān)的原癌基因表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。但無論如何，最終都要通過影響睪丸間質(zhì)細(xì)胞生成睪酮的能力起作用，而這種能力包括睪丸間質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量以及單個睪丸間質(zhì)細(xì)胞的睪酮合成能力。細(xì)胞的數(shù)量與睪丸間質(zhì)細(xì)胞的增殖、凋亡有關(guān)，單個睪丸間質(zhì)細(xì)胞的睪酮合成就取決于其細(xì)胞內(nèi)睪酮合成相關(guān)酶的活性。c-ju

2、n作為睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌過程的原癌基因之一，具有促進(jìn)睪酮分泌的作用。但究竟c-jun是影響睪丸間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量或者影響單個睪丸間質(zhì)睪酮合成相關(guān)酶，目前還不清楚。有研究表明，c-jun對細(xì)胞增殖有正性調(diào)控作用。因此，本實(shí)驗(yàn)通過研究c-jun對基礎(chǔ)狀態(tài)下睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖的影響，從而為進(jìn)一步探索c-jun在睪酮分泌中的作用機(jī)制提供參考。
　　 本實(shí)驗(yàn)以3周齡仔豬為研究對象，采取其睪丸分離獲得睪丸間質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)活力、純度和功能評價后在體外進(jìn)

3、行培養(yǎng)，分別以0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L c-jun ASODNs處理，利用實(shí)時熒光定量PCR檢測c-jun ASODNs對睪丸間質(zhì)細(xì)胞c-jun mRNA的阻斷作用，MTT法檢測c-junASODNs對睪丸間質(zhì)細(xì)胞生長的抑制作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測c-jun ASODNs對睪丸間質(zhì)細(xì)胞周期的影響，以研究c-jun對基礎(chǔ)狀態(tài)下睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖的影響。
　　 經(jīng)活力、純度和功能評價后，選擇細(xì)胞活力在95％以上、睪

4、丸間質(zhì)細(xì)胞純度在90％以上且睪酮分泌功能良好的細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。經(jīng)不同濃度c-jun ASODNs處理后，實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示0.125μmol/L c-jun ASODNs就能顯著下調(diào)c-jun mRNA的表達(dá)(p<0.01)，c-jun mRNA表達(dá)量隨著濃度增加而降低，但到1μmol/L后c-jun mRNA表達(dá)不再減少。MTT法檢測結(jié)果表明c-jun ASODNs能明顯抑制睪丸間質(zhì)細(xì)胞的生長(p<0.01)，且濃度與生長抑

5、制率間正相關(guān)(r=0.8966)。通過流式細(xì)胞儀檢測睪丸間質(zhì)細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)0.125μmol/L c-jun ASODNs能顯著減少進(jìn)入S期的睪丸間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量(p<0.01)，而相應(yīng)被阻滯在G0/G1期的細(xì)胞數(shù)量顯著增加(p<0.01)。與對照組相比，G0/G1期細(xì)胞數(shù)量百分比分別增加5.78％、11.36％、16.73％、22.25％、23.36％。
　　 通過實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論：
　　 (1)c-jun ASODNs能