c-Jun在三苯氧胺抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖中的作用初探.pdf

1、目的：
　　三苯氧胺（TAM）是一種非固醇類藥物，在乳腺癌的預(yù)防和治療中最為常用，其作用機(jī)理是競爭性地抑制雌激素與雌激素受體（ER）的結(jié)合。本論文主要研究了不同濃度TAM作用于兩種乳腺癌細(xì)胞后，對細(xì)胞的增殖、c-Jun的表達(dá)以及AP-1活性的影響，探討c-Jun在三苯氧胺抑制乳腺癌細(xì)胞增殖中的作用。
　　方法：
　　1、不同濃度的TAM作用于ER陽性乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和ER陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-435后，應(yīng)

2、用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞的增殖能力；RT-PCR、Western Blot檢測c-Jun mRNA和蛋白水平的表達(dá)；同時(shí)應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)分析不同濃度TAM對兩種乳腺癌細(xì)胞株中AP1（PMA）、AP1信號(hào)路徑的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。
　　2、c-Jun真核表達(dá)載體的構(gòu)建：通過PCR的方法克隆得到c-Jun基因全長序列，裝入真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP；重組質(zhì)粒表達(dá)載體經(jīng)酶切、測序鑒定；將c-Jun真核表達(dá)載體pIRES2-

3、c-Jun和c-Jun干擾表達(dá)載體pGPU6/GFP/Neo-c-Jun-shRNA分別通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞后，用不同濃度的TAM處理細(xì)胞，應(yīng)用CCK-8試劑盒檢測各組細(xì)胞的增殖能力。
　　結(jié)果：
　　1、TAM對細(xì)胞增殖以及c-Jun表達(dá)的影響：CCK-8結(jié)果顯示，與對照組比較，不同濃度的TAM均可抑制MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-435細(xì)胞的增殖，且抑制率隨劑量增大而增高；RT-PCR、Western Blo

4、t檢測結(jié)果顯示，不同濃度TAM對c-Jun表達(dá)沒有顯著性影響；熒光酶報(bào)告基因結(jié)果顯示，TAM對MCF-7細(xì)胞株中AP1（PMA）相關(guān)信號(hào)通路有激活作用，且對TAM呈劑量依賴性。
　　2、c-Jun真核表達(dá)載體的構(gòu)建：重組質(zhì)粒表達(dá)載體經(jīng)酶切、測序鑒定，證實(shí)載體構(gòu)建成功；c-Jun對TAM抑制MCF-7細(xì)胞增殖作用中的影響：CCK-8結(jié)果顯示，高表達(dá)c-Jun，可以提升TAM對MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用；而低表達(dá)c-Jun則降低了T

5、AM對MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　結(jié)論：
　　1、TAM既可以抑制ER陽性乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖，也可以抑制ER陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435的增殖；TAM對兩株細(xì)胞中c-Jun的表達(dá)沒有顯著性影響，但TAM可激活MCF-7細(xì)胞中PKC通路，從而誘導(dǎo)AP-1活性的升高。
　　2、c-Jun真核表達(dá)載體構(gòu)建成功，c-Jun可能參與了TAM抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖。
　　綜上所述，不同濃度的TA