家蠶-BmNPV表達(dá)載體系統(tǒng)高效表達(dá)人乙肝表面抗原（PreS2+S）及表達(dá)產(chǎn)物免疫原性的研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文家蠶BmNPV表達(dá)載體系統(tǒng)高效表達(dá)人乙肝表面抗原（PreS2S）及表達(dá)產(chǎn)物免疫原性的研究姓名：楊瑞麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：吳玉澄張耀洲2002.5.1第5d表達(dá)量最高；BmPAK—HBMp感染后的蛹，PreS2Ag的表達(dá)量在第5d達(dá)最大值，而HBsAg在第6d達(dá)最大值。由此推測M蛋白(PreS2S)的表達(dá)早于只含s區(qū)的小蛋白。另一方面，ELISA檢測表明，PreS2抗原性提高率約是HBsA

2、g的14倍，提示BmPAK—HBMp中多角體基因部分堿基序列的存在更有利于從PreS2前的ATG開始表達(dá)中蛋白全基因(PreS2S)。Western雜交結(jié)果表明，感染BfIlPAK一腿Mp和BmPAKHBM的家蠶蛹血淋巴中均有4種不同分子量的蛋白質(zhì)和鼠抗人的一抗發(fā)生免疫反應(yīng)，大小約分別為3lkD、30kD、28kD、25kD。推測31kD處的條帶為起始于PreS2起始密碼子ATG的表達(dá)產(chǎn)物，同時(shí)具有PreS2和s抗原性，30kD處的雜交

3、條帶為起始于s基因起始密碼子ATG表達(dá)產(chǎn)物的糖基化形式，25kD的條帶可能是中蛋白的降解產(chǎn)物，而28kD的條帶可能25l【D條帶的糖基化形式。對(duì)重組乙肝表面抗原(Pres2S)基因在家蠶中高效表達(dá)所需環(huán)境條件的優(yōu)化結(jié)果表明，外源基因表達(dá)的宿主蠶品種對(duì)表達(dá)量的影響很大，rHBsAg在浙蕾春曉、豐一X54A及白玉新杭中的表達(dá)量最高，在871X872中的表達(dá)量最低，不同品種間之間的表達(dá)水平可相差8倍，可見選擇適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)宿主(蠶品種)可以大幅度

4、提高外源基因的表達(dá)產(chǎn)量。蛹接種后保育的溫度對(duì)蛹的表達(dá)活性也有較大的影響，保育在23℃～26℃中蛹表達(dá)活性是保育在30“C中的32倍，在20“C中的表達(dá)量下降1倍。接種病毒的滴度及不同飼養(yǎng)季節(jié)對(duì)表達(dá)活性有一定的影響。較高的接種病毒滴度能獲的較高表達(dá)量的外源蛋白。病毒滴度為1106pfu時(shí)，rHBsAg可獲得最高表達(dá)活性，而低于1106pfu表達(dá)活性下降。春季蠶的表達(dá)量比秋季高1倍左右。我們還經(jīng)～步探討了新鮮蠶蛹(繭)低溫貯藏對(duì)rHBsAg