幽門螺桿菌UreB抗原與CTB在蠶蛹中的融合表達及免疫原性研究.pdf

1、幽門螺桿菌是慢性活動性胃炎、十二指腸潰瘍、胃黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤和胃癌的主要致病因素，目前的治療手段主要是應(yīng)用抗生素治療的三聯(lián)療法和四聯(lián)療法，但是隨著菌體抗生素抗性的增加，治愈率明顯降低，免疫治療可能是有效防治幽門螺桿菌感染最有前景的方法之一，幽門螺桿菌疫苗的研制已經(jīng)成為目前研究的熱點。家蠶生物反應(yīng)器主要是利用家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)表達外源蛋白，因其低成本、高表達量、產(chǎn)物天然性好而著稱。本文旨在利用家蠶生物反應(yīng)器表達CTB免疫佐劑和幽門

2、螺桿菌UreB抗原融合蛋白，并對其免疫原性進行研究，為利用家蠶生物反應(yīng)器低成本生產(chǎn)幽門螺桿菌口服疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。
　　 首先，對重組桿狀病毒BmNPV-UreB中ureB基因進行了序列測定，SDS-PAGE和Western blotting分析顯示重組病毒在家蠶BmN細胞、幼蟲和蠶蛹中能穩(wěn)定表達；利用AKTA explorer10蛋白純化系統(tǒng)對家蠶幼蟲血淋巴中的UreB蛋白進行陰離子交換層析和凝膠過濾層析純化，經(jīng)雙向電泳進一

3、步分離后進行了質(zhì)譜鑒定。其次，采用原核表達系統(tǒng)表達了CTB蛋白，GM1親和活性分析表明表達的CTB蛋白具有較好的GM1親和活性，可以作為口服免疫佐劑。第三，利用Bac-to-Bac系統(tǒng)構(gòu)建了重組病毒BmNPV-(CTB-Linker-UreB)，對CTB和ureB基因進行了融合表達，SDS-PAGE和 Western blotting分析顯示重組桿狀病毒在家蠶BmN細胞和蠶蛹中成功表達；利用抗體親和層析對蠶蛹表達的CTB-Linker-