冷脅迫下東農(nóng)冬麥1號(hào)7種轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)模式與TaOBF1的結(jié)合特異性分析.pdf

1、低溫、干旱和鹽等非生物脅迫對(duì)植物的生長(zhǎng)和發(fā)育有著巨大影響，低溫脅迫是影響植物生長(zhǎng)和分布的主要影響因素之一。近年來(lái)的研究顯示基因的表達(dá)調(diào)控，特別是轉(zhuǎn)錄因子在植物響應(yīng)冷脅迫過(guò)程中起到重要作用。冬小麥“東農(nóng)冬麥1號(hào)”是東北農(nóng)業(yè)大學(xué)培育的抗凍冬小麥品種，據(jù)田間觀測(cè)數(shù)據(jù)表明，該品種可以抗-30℃低溫凍害。
　　 本研究通過(guò)對(duì)小麥中已知的bZIP等6個(gè)家族的7種轉(zhuǎn)錄因子在冬小麥東農(nóng)冬麥1號(hào)受極低溫度脅迫(-25℃)條件下的表達(dá)情況分析，以期

2、尋找冬小麥東農(nóng)冬麥1號(hào)中與冷脅迫有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，并對(duì)其調(diào)控的機(jī)制進(jìn)行研究。TaOBF1轉(zhuǎn)錄因子是小麥中的OBF1型轉(zhuǎn)錄因子，而TaOBF1和DNA的結(jié)合特異性的研究未見(jiàn)報(bào)道，因此本研究通過(guò)凝膠阻滯試驗(yàn)證明TaOBF1轉(zhuǎn)錄因子是否也與G-box具有結(jié)合特異性，從而揭示TaOBF1轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控基因表達(dá)的規(guī)律，也為冷脅迫下冬小麥基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)理研究提供了參考。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：⑴實(shí)時(shí)熒光定量PCR表明，在東農(nóng)冬麥1號(hào)中隨著溫度的降低，轉(zhuǎn)錄因子

3、TaOBF1、MYB3和HvWRKY6轉(zhuǎn)錄因子基因的表達(dá)均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，且變化幅度大于較濟(jì)麥22。說(shuō)明上述3種轉(zhuǎn)錄因子與冬小麥響應(yīng)冷脅迫具有相關(guān)性。而轉(zhuǎn)錄因子DRFL2、FLbaf113d20、HvWRKY6和NAC69-1基因的表達(dá)的規(guī)律性較不太顯著，說(shuō)明這4種轉(zhuǎn)錄因子與冬小麥響應(yīng)冷脅迫的關(guān)系不明確。⑵克隆了全長(zhǎng)的TaOBF1轉(zhuǎn)錄因子基因，通過(guò)構(gòu)建pET-32b-TaOBF1原核表達(dá)載體和優(yōu)化表達(dá)條件獲得的融合蛋白，并通過(guò)進(jìn)