牛乳中硫氰酸鈉含量檢測(cè)——高效液相色譜法與毛細(xì)管電泳法的建立.pdf

1、硫氰酸鹽存在于各類(lèi)天然食品（包括乳制品）中，并可在人類(lèi)肝臟中合成，是氰化物解毒的代謝產(chǎn)物。硫氰酸鹽適量添加于牛乳中，可以起到抑菌，保鮮，延長(zhǎng)保質(zhì)期的作用。但其毒理研究結(jié)果顯示，過(guò)量攝入硫氰酸鹽，可引發(fā)急性中毒反應(yīng)，超過(guò)限量攝取也可妨礙機(jī)體對(duì)碘的利用，引起甲狀腺疾病，尤其對(duì)胎兒和嬰兒的智力和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育存在較大的副作用。
　　 目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)牛奶中的硫氰酸鹽的檢測(cè)主要利用分光光度計(jì)、離子色譜-電導(dǎo)檢測(cè)器、離子色譜-二極管陣列檢測(cè)器

2、、離子色譜-質(zhì)譜檢測(cè)器等儀器進(jìn)行檢測(cè)。但是，國(guó)內(nèi)尚未制定檢測(cè)牛奶中硫氰酸鈉含量的標(biāo)準(zhǔn)方法，因此也未制定出相關(guān)的生鮮乳中硫氰酸鈉的限值，并難以進(jìn)行乳中硫氰酸鹽對(duì)人類(lèi)健康潛在危害的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。本文旨在建立高效液相色譜法檢測(cè)乳中的硫氰酸鹽含量，以求能夠快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便地測(cè)定乳品中的硫氰酸鹽含量，一方面豐富檢測(cè)的手段，另一方面為制定生鮮乳中硫氰酸鈉的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)分別采用高效液相色譜法和毛細(xì)管電泳法對(duì)原奶和市售巴氏成品乳

3、中硫氰酸鈉含量的檢測(cè)方法進(jìn)行了研究。
　　 根據(jù)反相離子對(duì)色譜法的原理，建立了檢測(cè)牛奶中硫氰酸鈉質(zhì)量濃度的高效液相色譜方法。前處理使用乙腈沉淀蛋白，堿性氧化鋁SPE柱除去部分水溶性維生素、氨基酸，離心脫脂得到樣品。以磷酸三乙胺(pH=7.0)∶甲醇=95∶5作為流動(dòng)相，用Agela-ASBr(R)C18反相色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱溫30℃±2℃，流速0.8mL/min，以二極管陣列紫外檢測(cè)器分析樣品。該分析方

4、法質(zhì)量濃度范圍在5～500mg/L內(nèi)線性較好，r＞0.9995。該方法可適用于生鮮乳和巴氏滅菌成品乳，檢測(cè)限可達(dá)到0.1 mg/kg，定量范圍0.5～50 mg/kg，精確度＜10％，回收率＞90％。
　　 利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法直接檢測(cè)牛奶中硫氰酸鈉質(zhì)量濃度。前處理與高效液相色譜法相同。在NaH2PO4-Na2B4O7緩沖液中加入溴化十四烷基三甲基溴化銨(TTAB)作為電滲流反相作用劑，分離電壓-20 kV，分離溫度30℃，電極

5、反向，以二極管陣列紫外檢測(cè)器218 nm波長(zhǎng)下分析樣品，質(zhì)量濃度范圍在5～500 mg/L內(nèi)線性較好，r＞0.9995。該方法可適用于生鮮乳和巴氏滅菌成品乳，檢測(cè)限可達(dá)到0.05mg/kg，定量范圍0.5～50 mg/kg，精確度＜10％，回收率＞90％。
　　 對(duì)高效液相色譜法和毛細(xì)管電泳法檢測(cè)牛奶中的硫氰酸鈉含量進(jìn)行比較，毛細(xì)管電泳法的最低檢測(cè)限為0.05mg/kg，低于高效液相色譜法的最低檢測(cè)限0.1mg/kg，因此毛細(xì)管

6、電泳法在檢測(cè)靈敏度方面也比高效液相色譜高;高效液相色譜法在97.6～98.3％之間，毛細(xì)管電泳回收率在97.8～99.6％之間，但是高效液相色譜法的重復(fù)回收率測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)偏差均值為0.5％低于毛細(xì)管電泳法的標(biāo)準(zhǔn)偏差均值1.2％，因此高效液相色譜法具有更高的穩(wěn)定性;毛細(xì)管電泳法的理論塔板數(shù)9685高于液相色譜法的理論塔板數(shù)7623，因此其分離效果更好;毛細(xì)管電泳法的單個(gè)樣品分析時(shí)間為6分鐘，高效液相色譜法為15分鐘，因此毛細(xì)管色譜法的分析時(shí)間

7、更短。綜上所述，兩種方法所得含量檢測(cè)結(jié)果和添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，檢測(cè)含量范圍也一致，兩種方法都具有較高的準(zhǔn)確性、精密性和穩(wěn)定性。
　　 同時(shí)，也將兩種新方法和文獻(xiàn)報(bào)道中原有的紫外分光光度法和離子色譜法進(jìn)行了比較，毛細(xì)管電泳的檢測(cè)靈敏度最高為0.05mg/kg，低于離子色譜法的最低檢測(cè)限0.08mg/kg，也低于高效液相色譜法的最低檢測(cè)限0.10mg/kg和紫外分光光度法的最低檢測(cè)限2mg/kg;離子色譜法回收率在98.0～106

8、.4％之間，高效液相色譜法在97.6～98.3％之間，毛細(xì)管電泳回收率在97.8～99.6％之間，紫外分光光度法在82.57～87.71％，離子色譜法的回收率較高，但是高效液相色譜法的回收率測(cè)定結(jié)果離散程度最小，因此高效液相色譜法具有更高的準(zhǔn)確性;高效液相色譜法的穩(wěn)定性最好，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.65％，低于毛細(xì)管電泳法的1.45％，也低于離子色譜法的0.80％和紫外分光光度法的2.0％。綜上所述，本文建立的兩種新方法在準(zhǔn)確性、精密性和