牛源多殺性巴氏桿菌莢膜和毒力相關(guān)基因的克隆及序列分析.pdf

1、隨著規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和飼養(yǎng)密度的提高，疾病出現(xiàn)混合感染的機會越來越多，許多細(xì)菌扮演著繼發(fā)感染的角色，多殺性巴氏桿菌就是其中一員。2007年，新疆石河子先后有6個規(guī)?；膛?-9周齡犢牛突然發(fā)病，共有90余頭犢牛死亡，通過臨床癥狀以及病原菌的分離鑒定，診斷為多殺性巴氏桿菌引起的犢牛肺炎。為追溯病原，更有效地控制該病的發(fā)生，本研究從犢牛肺炎發(fā)生牛場采集了健康犢牛鼻腔棉拭，通過對細(xì)菌的分離、生化鑒定、藥敏實驗、動物實驗及PCR方法的檢測，

2、得到了2株多殺性巴氏桿菌。對所分離得到的多殺性巴氏桿菌以及實驗室保存的致犢牛肺炎多殺性巴氏桿菌莢膜和毒力相關(guān)基因hasR、ompH、plpE、ptfA進(jìn)行克隆測序及序列分析，以便進(jìn)一步調(diào)查致犢牛肺炎巴氏桿菌病的傳染源，為研究多殺性巴氏桿菌的致病機理，相關(guān)基因的分子特性以及表達(dá)奠定基礎(chǔ)。結(jié)果如下：
　　 1、鼻腔棉拭分離的2株生化鑒定結(jié)果、分離菌形態(tài)特征及培養(yǎng)特性與多殺性巴氏桿菌一致。動物實驗表現(xiàn)為24小時內(nèi)實驗小鼠全部死亡，表現(xiàn)

3、很強的致病性，并可以從死亡的小鼠體內(nèi)分離得到所感染菌，組織染色可明顯觀察到兩極濃染現(xiàn)象。
　　 2、參考Townsend發(fā)表的多殺性巴氏桿菌種特異性基因引物以及血清型特異性基因引物，以2株分離菌的DNA為模板，通過多重PCR擴增，結(jié)果可以擴增出500bp和1000bp左右的兩條帶，回收后測序并在GenBank中進(jìn)行Blast比對，顯示分別與多殺性巴氏桿菌種特異性基因和莢膜血清A型基因同源性都在99%以上。
　　 3、藥敏

4、試驗表明，健康牛鼻腔棉拭分離得到的2株P(guān)m對新霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星表現(xiàn)高敏，對氨芐青霉素鈉、頭孢拉定、卡那霉素、頭孢噻呋鈉、阿米卡星表現(xiàn)耐受。
　　 4、通過對莢膜和毒力相關(guān)基因hasR、ompH、plpE、ptfA的序列克隆與分析表明， Pm-BS-d、Pm-BS-a、Pm142-x-4、Pm142-x-3、Pm149-x、Pm149-xby之間同源性為82.2%-100%，這些基因在不同多殺性巴氏桿菌