煙草屬(Nicotiana)抗病基因VIGS沉默系統(tǒng)的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、植物中已經(jīng)克隆出來的抗病基因大多數(shù)包含NBS-LRR結(jié)構(gòu)域，這類基因經(jīng)常以簇的形式存在于基因組中，其中有功能的抗病基因會與其相應(yīng)病原體的無毒基因作用，發(fā)生程序性細(xì)胞死亡(即過敏反應(yīng))，從而限制病原物的擴(kuò)散來保護(hù)植株的其它部位不受侵染。本實驗以煙草野生種為對象，研究接種苗齡、農(nóng)桿菌濃度、乙酰丁香酮濃度和培養(yǎng)溫度等四個方面對11種煙草野生種VIGS(virus induced genesilencing，VIGS)沉默效率的影響，優(yōu)化最合適

2、的VIGS沉默體系：研究表明，在煙草苗齡6葉(出苗后生長20～25天)，侵染的農(nóng)桿菌OD600值0.6，AS濃度為400mmol/L，培養(yǎng)環(huán)境為22℃，16 h黑暗；18℃，8h光照條件下，可以獲得VIGS沉默的最佳效果。此外，本研究在該條件下對另外14種煙草野生物種VIGS沉默效率也進(jìn)行了研究。同時根據(jù)茄科中已知的抗病基因的序列設(shè)計引物，在Nicotiana alata中擴(kuò)增，進(jìn)而構(gòu)建pTRV系統(tǒng)病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)載體。本

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