馬來甜龍竹再生體系的建立及竹子轉基因研究.pdf

1、竹子遺傳育種研究比較薄弱。本研究以馬來甜龍竹的成熟種胚為外植體,通過愈傷組織途徑,建立了其高效、穩(wěn)定的再生體系。在此基礎上,結合本課題組建立的版納甜龍竹的再生體系,開展了轉基因研究,初步建立了竹子的遺傳轉化體系,為竹子的遺傳改良打下了良好的基礎。主要的研究結果如下:
　　 1.馬來甜龍竹再生體系的建立
　　 (1)優(yōu)化的愈傷組織誘導培養(yǎng)基:MS+蔗糖30g/L+2,4-D3mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500m

2、g/L+水解酪蛋白500mg/L+agar8g/L(TypeA),愈傷組織的誘導率達到85％以上,并且較好的愈傷組織誘導率占30％左右。
　　 (2)優(yōu)化的增殖培養(yǎng)基:MS+蔗糖30g/L+2,4-D0.5mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500mg/L+水解酪蛋白500mg/L+agar8g/L(TypeA')。
　　 (3)優(yōu)化的分化培養(yǎng)基:MS+蔗糖30g/L+BA2mg/L+KTlmg/L+NAA0.5mg

3、/L+gelrite0.3％,分化率約45％。本實驗中繼代次數以2次即6周為最好,愈傷組織繼代次數4次或5次時,分化率明顯降低,并且易分化出白化苗。
　　 (4)優(yōu)化的生根培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖30g/L+3mg/L的IBA+gelrite0.3％。生根率高達90％,每個植株的平均誘導根數為6-7條,最高可達約15條,誘導出的根的平均長度約3.39cm。
　　 (5)生根的試管苗馴化后移栽到等比例的泥炭、蛭石和珍珠巖的

4、混合基質中,植株的成活率達95％以上。
　　 2.竹子轉基因研究
　　 以版納甜龍竹的愈傷組織為受體,通過農桿菌把pCAMBIA1301載體相關DNA片段轉入版納甜龍竹的愈傷組織中,通過再分化成功獲得10株抗性再生植株,轉化率達到35.7％。對其進行PCR分子檢測及其電泳產物測序,結果證實潮霉素磷酸轉移酶基因已轉入竹子的基因組中。
　　 在馬來甜龍竹轉基因研究中,愈傷組織在添加潮霉素進行篩選培養(yǎng)6周后轉移至分化培