奶牛乳腺上皮細(xì)胞系的建立及生理功能鑒定.pdf

1、本試驗(yàn)采用組織塊法分離培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞，采用多種方法純化細(xì)胞，且對純化的上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)和生理功能進(jìn)行鑒定，并以十六代細(xì)胞為材料，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測奶牛乳腺上皮細(xì)胞在脂多糖刺激下，細(xì)胞因子IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達(dá)，并研究了催乳激素和賴氨酸處理時(shí)乳蛋白合成和分泌功能，結(jié)果說明本試驗(yàn)培養(yǎng)的細(xì)胞具有正常的乳腺上皮細(xì)胞功能，為進(jìn)一步研究建立具有正常功能的永生化奶牛乳腺上皮細(xì)胞系奠定基礎(chǔ)。
　　 試驗(yàn)一用組織塊培

2、養(yǎng)法獲得大量奶牛的原代乳腺上皮細(xì)胞，聯(lián)合運(yùn)用刮除法、相差消化和相差貼壁法、單克隆法可獲得純化的、活力旺盛的乳腺上皮細(xì)胞，且在體外可連續(xù)傳代二十五代以上，但隨著細(xì)胞超過二十五代以后增殖活力有所下降。應(yīng)用熒光免疫組化、核型分析和β-酪蛋白表達(dá)檢測了體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞的形態(tài)特征和乳蛋白表達(dá)，同時(shí)檢測到細(xì)胞角蛋白18的表達(dá)，并鑒定為上皮細(xì)胞；此外，研究還發(fā)現(xiàn)在不添加催乳激素的情況下，檢測到乳腺上皮細(xì)胞能夠表達(dá)較低的β-酪蛋白，實(shí)現(xiàn)了奶牛

3、乳腺上皮細(xì)胞系的建立。
　　 試驗(yàn)二初步篩選出脂多糖刺激奶牛乳腺上皮細(xì)胞的適宜濃度，再以該濃度刺激細(xì)胞，通過RT-PCR法檢測細(xì)胞因子IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達(dá)，試驗(yàn)結(jié)果表明：脂多糖刺激奶牛乳腺上皮細(xì)胞24h后，IL-6、IL-8表達(dá)量顯著升高(P<0.05)；TNF-α在脂多糖刺激后4h表達(dá)量達(dá)最高(P<0.05)。研究表明，該細(xì)胞可作為研究奶牛乳房炎病理機(jī)制以及細(xì)胞免疫作用的模型。
　　 試驗(yàn)三催乳