豬附紅細(xì)胞體抗原分析及間接ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf

1、為了解豬附紅細(xì)胞體的抗原特性，本研究建立了三種解離豬附紅細(xì)胞體的方法，將解離下的豬附紅細(xì)胞體經(jīng)超聲波裂解制備成體抗原，經(jīng)SephadexG-200分離提純后，應(yīng)用對(duì)流免疫電泳(CIEP)定位特異性抗原蛋白峰，再應(yīng)用十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及免疫印跡(Westernblotting)對(duì)豬附紅細(xì)胞體的粗提及純化的體抗原進(jìn)行了分析；并且對(duì)提取的豬附紅細(xì)胞體體外培養(yǎng)液中的分泌抗原進(jìn)行了分析，與體抗原進(jìn)行了比較。結(jié)果

2、表明，豬附紅細(xì)胞體的體抗原有四條蛋白帶，其分子量分別為77kD、62kD、58kD、29kD，其中特異性抗原分子量為58kD和29kD；而分泌抗原僅出現(xiàn)一條蛋白帶，與體抗原中的29kD蛋白帶大小相同，并具有較好的反應(yīng)原性。說(shuō)明豬附紅細(xì)胞體的體抗原和分泌抗原中均含有反應(yīng)原性較好的抗原蛋白。 為進(jìn)一步完善豬附紅細(xì)胞體的血清學(xué)診斷技術(shù)，本研究應(yīng)用提純抗原建立了檢測(cè)豬附紅細(xì)胞體抗體的間接ELISA方法。結(jié)果表明，抗原濃度為5μg/ml、