豬附紅細(xì)胞體PCR診斷方法的建立和小鼠動(dòng)物模型的建立.pdf

1、豬附紅細(xì)胞體病是由寄生于豬紅細(xì)胞或血漿中的豬附紅細(xì)胞體(Mycoplasma Suis)引起豬的一種傳染病。目前，很多國(guó)家的研究人員加深對(duì)該病關(guān)于病原學(xué)方面、流行病學(xué)方面、免疫學(xué)方面等的研究，但在防治方面還未發(fā)現(xiàn)有效的方法。因此通過建立豬附紅細(xì)胞體動(dòng)物感染模型，更加深入的了解該病，進(jìn)而為豬附紅細(xì)胞體病防治研究奠定基礎(chǔ)。
　　為建立豬附紅細(xì)胞體的PCR診斷方法，本試驗(yàn)根據(jù)豬附紅細(xì)胞體Eno基因序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物，優(yōu)化反應(yīng)條

2、件，構(gòu)建了重組質(zhì)粒，并進(jìn)行了敏感性試驗(yàn)和特異性試驗(yàn)。結(jié)果顯示，目的片段大小為170bp，與GenBank登錄序列同源性為98％。敏感度可檢測(cè)1.772ng/μL病原 DNA；特異性試驗(yàn)結(jié)果：豬肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌、弓形蟲、豬鏈球菌、豬呼吸與繁殖綜合征病毒樣品均無交叉反應(yīng)。
　　為建立豬附紅細(xì)胞體的小鼠動(dòng)物模型，并研究病原感染特性。本研究分別設(shè)計(jì)了不同小鼠處理的人工感染試驗(yàn)、不同病原形式的感染試驗(yàn)、凍存病原感染試驗(yàn)、小鼠模型血

3、液再感染小鼠試驗(yàn)。并通過對(duì)小鼠模型中的病原進(jìn)行掃描電鏡觀察、SDS-PAGE抗原分析和特異基因片段序列測(cè)定，來鑒定小鼠模型感染的病原。結(jié)果顯示：不同小鼠處理的人工感染試驗(yàn)中，昆明鼠切脾組、昆明未切脾組和BALB/C組小鼠均可感染豬附紅細(xì)胞體，但昆明鼠切脾組小鼠感染情況優(yōu)于昆明未切脾組和BALB/C組。不同病原形式的感染試驗(yàn)中，豬附紅細(xì)胞體陽性血液樣本和純化的豬附紅細(xì)胞體樣本均可感染切脾小鼠，但豬附紅細(xì)胞體陽性血液樣本組小鼠感染情況優(yōu)于豬

4、附紅細(xì)胞體純化樣本組小鼠。凍存病原感染試驗(yàn)中，凍存6個(gè)月的陽性血液樣本和純化的豬附紅細(xì)胞體樣本均可感染切脾小鼠，但兩組的感染情況均不如未凍存的陽性血液組。小鼠模型血液再感染小鼠試驗(yàn)中，小鼠模型陽性血液樣本可再次感染切脾小鼠，感染情況與豬陽性血液樣本組沒有明顯差別。通過對(duì)切脾昆明種小鼠模型中的病原進(jìn)行電鏡觀察、SDS-PAGE抗原分析和特異基因片段序列測(cè)定，結(jié)果與豬附紅細(xì)胞體無差別。結(jié)果表明，本研究成功建立了豬附紅細(xì)胞體感染小鼠模型，各種