ATPase域調(diào)節(jié)結(jié)核分枝桿菌螺旋酶GyrB與GyrA的相互作用.pdf

1、DNA螺旋酶是一種類型Ⅱ的拓?fù)洚悩?gòu)酶，它是唯一的能夠能夠向DNA鏈中引入負(fù)超螺旋的拓?fù)洚悩?gòu)酶，這一過程是需要ATP水解的能量。螺旋酶存在于細(xì)菌體內(nèi)，但是人體內(nèi)不含有此種酶，所以成了很多藥物的靶標(biāo)，比如臨床上應(yīng)用比較廣泛的喹諾酮藥物。
　　 但是關(guān)于GyrA和GyrB之間的具體的作用區(qū)域或者是位點(diǎn)還沒有人進(jìn)行研究，本人所在的課題組借助前人的關(guān)于螺旋酶的作用的模型已經(jīng)把相互作用的范圍縮小在GyrB的Toprim結(jié)構(gòu)域。我們本課題就是

2、基于這個(gè)基礎(chǔ)提出的，我們通過對GyrB的ATPase域進(jìn)行逐步的截短，然后通過酵母雙雜交技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證階截短的GyrB能夠和GyrA發(fā)生相互作用，并利用X-gal顯色的方法證明兩者之間的結(jié)合能力的大小，并進(jìn)行兩者之間的親和力和結(jié)合常數(shù)的大小，并通過一定的手段來測定截短的GyrB以及重組酶相對于野生型的構(gòu)象的變化。
　　 本課題的目的是想得出GyrB的ATPase結(jié)構(gòu)域在GyrA和GyrB之間的相互作用中起的作用以及這個(gè)結(jié)構(gòu)域是通過

3、何種方式來影響兩者之間的相互作用的。能夠?yàn)橹委熃Y(jié)核病的藥物的開發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 本課題的主要研究結(jié)果為：
　　 1、依據(jù)gyrB基因序列，擴(kuò)增突變體片段gyrB79-714、gyrB183-714、gyrB△79-182、gyrB△294-465；將擴(kuò)增的片段分別與表達(dá)載體pET28a和酵母載體pGADT7相構(gòu)建；并進(jìn)行蛋白純化。
　　 2、酵母雙雜交、SPR等實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：ATPase、Transd