結核分枝桿菌的DNA復制起始因子相互作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、分類號密級:華中農業(yè)大學碩士學位論文結核分枝桿菌的DNA復制起始因子相互作用的研究TheinteraetionsbetweenDNArePlieationinitiatorsin龍tycobacteriumtuberculesis研究生:指導教師:謝運昌何正國教授專業(yè):微生物學獲得學位名稱:理學碩士研究方向:提交論文時間:分子微生物學2009年6月華中農業(yè)大學生命科學與技術學院二00九年六月結核分枝桿菌的DNA復制起始因子之間的相互作用

2、研究1.1供試菌株.........................................................................................……191.2酶、試劑和試劑盒....................................................................……:…191.3供試抗生素.........................

3、...........................................................……191.4引物及寡核營酸............................................................................……201.5供試質粒............................................................

4、............................……211.6其余緩沖液、試劑........................................................................……221.7培養(yǎng)基.............................................................................................……

5、242方法...........................................................................................................……252.1分子生物學基本操作....................................................................……252.2細菌雙雜交實驗..........

6、..................................................................……252.2.1雙雜交篩選培養(yǎng)基的配制.................................................……252.2.2細菌雙雜交質粒的構建.....................................................……252.2.3互作篩選

7、.............................................................................……262.3融合蛋白的親和純化....................................................................……262.3.1表達質粒的構建與轉化........................................

8、.............……262.3.2誘導與預處理.....................................................................……262.3.3含有6His融合標簽蛋白的親和純化................................……272.3.4含有GST融合標簽的親和純化........................................……

9、272.3.5蛋白的透析.........................................................................……282.3.6Bradfd測定蛋白質濃度...................................................……282.4大分子相互作用檢測..............................................

10、......................……282.4.1蛋白Pull一Down...................................................................……282.4.2West的blothng檢測...........................................................……292.4.3SPR檢測蛋白互作與核酸蛋白互作....

11、..............................……302.4.4瓊脂糖凝膠阻滯遷移分析(EMSA)....................................……30第三章結果與分析.............................................................................................……311細菌雙雜交文庫篩選及相互作用蛋白的鑒

12、定.......................................……311.1MthDnaB與MthDnaEZ基因的克隆.............................................……311.2篩選結果及分析............................................................................……31ZMthDnaA與MthD

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