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文檔簡介
1、林蛙“紅腿病”是危害林蛙養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病之一,該病傳播快、死亡率高,對林蛙的養(yǎng)殖業(yè)的危害嚴(yán)重。嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)是林蛙“紅腿病”的主要致病菌。該菌的致病力與毒力因子關(guān)系密切,尤其是氣溶素(Aer)。氣溶素由463個氨基酸組成,分子質(zhì)量為51.5 ku,是嗜水氣單胞菌主要的毒力因子之一,具有溶血性、細胞毒性和腸毒性。該菌的血清型多,在不同的地區(qū)、不同的宿主都有所差異,這對滅活苗的使用造成了很大的
2、限制。找出不同血清型菌株共同的保護性抗原,研制出新型亞單位疫苗是現(xiàn)在研究的迫切需求。
本試驗根據(jù)GenBank上報道的嗜水氣單胞菌氣溶素基因序列(NCBI登錄號:DQ186611),針對該基因的保守區(qū),設(shè)計了一對擴增氣溶素基因的特異性引物,以從林蛙體內(nèi)分離的嗜水氣單胞菌基因組DNA為模版,用PCR方法擴增目的片段,將該基因克隆pMDl8-T載體上,經(jīng)PCR、酶切及序列測定的鑒定和分析,結(jié)果表明成功地克隆了1163 bp的林蛙嗜
3、水氣單胞菌氣溶素基因,對所克隆的氣溶素基因序列與基因庫中已發(fā)表的DQ186611進行比較分析同源性高達99%。再將該基因克隆至原核表達載體pGEX-4T-1上,經(jīng)PCR鑒定及酶切鑒定,證明成功地構(gòu)建了原核表達載體 pGEX-Aer。將構(gòu)建好的原核表達載體,經(jīng)1 mmol/L的IPTG誘導(dǎo),在大腸桿菌BL21中進行表達,經(jīng)過8 h表達量達到最高。該融合蛋白 pGEX-Aer的分子量約為69 ku,表達蛋白主要以包涵體形式存在。經(jīng)Weste
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