瘤胃混合厭氧真菌體外發(fā)酵產(chǎn)酶主要工藝參數(shù)及其應(yīng)用研究.pdf

1、本研究通過(guò)體外模擬瘤胃內(nèi)環(huán)境，利用取自嶗山奶山羊瘤胃內(nèi)的混合厭氧真菌為菌種，研究不同碳源和氮源對(duì)瘤胃真菌發(fā)酵產(chǎn)纖維素降解酶的影響，篩選出產(chǎn)酶活性最高的培養(yǎng)基組成，并分別對(duì)各碳源組底物干物質(zhì)的消失率及各氮源組發(fā)酵液的pH變化進(jìn)行研究。然后利用篩選得到的最佳培養(yǎng)基，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，利用硫酸銨鹽析法獲得固體粗酶，并對(duì)粗酶制劑的最適溫度和最適pH進(jìn)行研究;最后利用所得粗酶粉處理玉米葉，確定粗酶制劑的最適添加量。整個(gè)試驗(yàn)分三部分進(jìn)行。
　　

2、 1.試驗(yàn)1采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)研究不同碳源（花生蔓、地瓜蔓、豆莢、玉米葉、濾紙）和不同氮源（酵母膏、蛋白胨、尿素、氯化銨、硫酸銨）對(duì)瘤胃真菌發(fā)酵產(chǎn)纖維素降解酶（羧甲基纖維素酶、木聚糖酶、β-葡萄糖苷酶）的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，花生蔓底物組除木聚糖酶的最高酶活低于豆莢組外，羧甲基纖維素酶和β-葡萄糖苷酶的最高酶活均為最高，分別比第二位的地瓜蔓組高出25.00％(P＜0.05)和14.67％(P＜0.05);氮源組中以蛋白胨組的3種纖維素降解

3、酶活性為最高，分別達(dá)到0.835U/mL、4.663U/mL、0.927U/mL，與其它氮源組相比差異顯著（P＜0.05）。綜上所述，最佳碳源和氮源分別為花生蔓和蛋白胨。
　　 試驗(yàn)還對(duì)各碳源組底物干物質(zhì)的消失率及各氮源組發(fā)酵液的pH變化進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，發(fā)酵120h后，花生蔓、地瓜蔓和玉米葉組的干物質(zhì)消失率均達(dá)到37％左右，顯著高于豆莢底物組和濾紙底物組(P＜0.05);各氮源組pH隨著時(shí)間增長(zhǎng)逐漸下降，其中以酵母膏組和尿

4、素組下降最為明顯，與另外3個(gè)氮源組相比差異顯著(P＜0.05）。
　　 2.試驗(yàn)2則利用篩選得到的最佳培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨鹽析后，將得到的粗酶沉淀烘干成粗酶粉，并對(duì)粗酶粉的最適溫度和最適pH進(jìn)行研究。結(jié)果表明，發(fā)酵液的最佳硫酸銨鹽析飽和度為65％;得到的木聚糖酶活得率為53.36％，羧甲基纖維素酶和β-葡萄糖苷酶的酶活得率較低，僅為16.81％和15.49％;粗酶的最適溫度范圍為40～50℃，最適pH范圍為5.0～

5、6.8。
　　 3.試驗(yàn)3采用封口袋法將稀釋后的粗酶粉按不同比例(0，1‰，2‰，3‰，4‰and5‰)添加到玉米葉中，研究酶粉對(duì)玉米葉中干物質(zhì)(DM)、中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)消失率的影響以及對(duì)粗蛋白(CP)和真蛋白(TP)含量變化的影響。結(jié)果表明，當(dāng)粗酶粉的添加量為4‰時(shí)，玉米葉中DM、NDF、ADF的消失率均達(dá)最高，分別為26.51％、24.93％和17.31％，與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05);