不同物種來源花色苷對A亞群禽白血病病毒感染的DF-1細胞生物活性的影響.pdf

1、禽白血病(Avianleukosis，AL)是指由反轉(zhuǎn)錄病毒科中禽反轉(zhuǎn)錄病毒屬的成員禽白血病/肉瘤病毒群病毒(ALN/RSV)引起雞的各種可傳播的良性和惡性腫瘤，是由禽白血病病毒和禽肉瘤病病毒群中的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。該病對雞能引起許多種具有傳染性的良性和惡性腫瘤。根據(jù)臨床癥狀可分為淋巴細胞性白血病、成紅細胞性白血病、成髓細胞性白血病、骨髓細胞瘤病、結(jié)締組織性腫瘤、骨硬化病等。
　　 第一部分，禽白血病病毒Rea

2、l-time熒光定量PCR方法的建立
　　 建立ALN-A的PCR檢測方法，分別擴增出大小為743bp的禽白血病特異性P27抗原片段和529bp的ALN-A特異性片段，P27片段與ALV-A亞群毒株ALV-RSA(M37980.1)、Myeloblastosis-associatedvirus(L10923.1)的相應(yīng)核苷酸序列的同源性分別達97％和96.6％，ALV-A特異性目的基因與ALV-A亞群毒株ALV-RSA(M379

3、80.1)、Myeloblastosis-associatedvirus(L10923.1)的相應(yīng)核苷酸序列的同源性分別達93.6％和96.8％。同時對此病毒大量繁殖，由于ALV-A病毒在細胞上無明顯CPE，對其采用real-time實時熒光定量法進行定量檢測，本研究根據(jù)禽白血病病毒禽白血病A亞群env基因序列特異的特點，在其gp85內(nèi)設(shè)計了1對引物，應(yīng)用Taqman探針法realtime實時定量檢測禽白血病病毒的方法，測得樣品量大約為

4、104.67模板拷貝/μl，對后續(xù)試驗應(yīng)用此ALN-A病毒提供了基本數(shù)據(jù)。
　　 第二部分，不同物種來源花色苷對DF-1細胞的作用
　　 本部分主要探索不同物種來源的花色苷對DF-1細胞的影響，初步摸索各種花色苷作用在DF-1細胞上的最適終濃度。通過直接觀察法探索了十種不同物種來源花色苷對DF-1細胞貼壁，生長的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同濃度的藍莓花色苷、心里美蘿卜花色苷、紫甘藍花色苷、紫甘薯花色苷、接骨木花色苷和紫玉米花色苷對

5、細胞貼壁和生長有明顯促進作用，同時能測得其對貼壁的最適終濃度；而黑豆皮花色苷、黑加侖花色苷、紅豆越橘花色苷和花楸花色苷不能使DF-1細胞貼壁和生長而導(dǎo)致細胞死亡。應(yīng)用MTT法探索上述六種對促進細胞貼壁和生長效果好的的花色苷，結(jié)果表明其對細胞活性具有明顯的正向效應(yīng)。
　　 第三部分，應(yīng)用MTT法檢測不同物種來源花色苷對感染禽白血病病毒細胞的生物活性
　　 分別在ALA-V感染DF-1細胞的同時(預(yù)防)或在ALV-A接種DF

6、-1細胞一小時后(治療)，將六種對DF-1細胞生長具有促進作用的六種花色苷(藍莓花色苷、心里美蘿卜花色苷、紫甘藍花色苷、紫甘薯花色苷、接骨木花色苷和紫玉米花色苷)以三個不同濃度(50μg/mL，75μg/mL和100μg/mL)加到DF-1細胞中，研究不同花色苷對感染ALV細胞的生物活性的影響。結(jié)果表明，無論是治療板還是預(yù)防板，不同濃度的心里美蘿卜花色苷均顯著提高了DF-1細胞的活性，而其他五種花色苷則作用效果不明顯。
　　 第