TLR4在雞小腸內(nèi)的分布規(guī)律研究.pdf

1、消化道不僅僅是消化器官，也是重要的免疫器官，在抵抗病原微生物的入侵過程中發(fā)揮十分重要作用。天然免疫是宿主對抗外來微生物感染的第一道防線，當微生物入侵時，宿主通過病源模式識別受體(pattern-recognition receptors，PRRs)識別病原相關分子模式(pathogen associated molecular patterns，PAMs)并啟動天然免疫，從而發(fā)揮防御作用。Toll樣受體(Toll-like recept

2、ors，TLRs)是天然免疫系統(tǒng)中一類模式識別受體，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)、胞漿區(qū)三個部分組成。TLR4(Toll-like receptor4，TLR4)是人類發(fā)現(xiàn)的第一個TLR相關蛋白，所有的細胞系幾乎均有分布，目前對它的研究受到越來越多的關注。但有關TLR4在雞腸道內(nèi)的分布規(guī)律以及TLR4與雞腸黏膜免疫的關系研究還較少。因此，本課題以1-6周齡科寶肉雞為研究對象，通過研究不同日齡雞腸道內(nèi)TLR4及神經(jīng).免疫.內(nèi)分泌相關細胞的變化規(guī)律以及

3、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激對其的影響來探討它們與腸道黏膜免疫的關系，主要研究內(nèi)容如下：
　　 1、雞小腸內(nèi)TLR4的增齡性變化規(guī)律
　　 為研究免疫因子TLR4在不同日齡雞小腸內(nèi)的分布及變化規(guī)律，探討TLR4對雞小腸黏膜免疫作用的可能機制，本課題采用免疫組化SABC方法對雞小腸內(nèi)TLR4的分布及表達變化做出研究。結果顯示：不同日齡雞小腸內(nèi)均表達TLR4，且具有較為明顯的日齡依賴式規(guī)律，表現(xiàn)

4、為隨著日齡的增加，TLR4在小腸內(nèi)的表達逐漸增強，同一時期的小腸中，TLR4在十二指腸內(nèi)分布最多，空腸次之，回腸內(nèi)分布最少。TLR4主要在腸上皮、腸黏膜固有層表達，腸腺周圍的固有層內(nèi)TLR4陽性細胞表達量較多，細胞多散在分布，也有少量集合成簇，形態(tài)多樣。這一研究結果提示我們，雞的腸道粘膜免疫是一個逐漸發(fā)育完善的過程，腸黏膜固有層為小腸發(fā)揮免疫功能的主要場所，且TLR4的增齡性表達可能與機體抵御微生物的感染所做出的防御性免疫反應相關。

5、r>　　 2、LPS刺激對雞小腸內(nèi)TLR4表達的影響
　　 本實驗采用LPS刺激模擬細菌感染后，研究TLR4在小腸內(nèi)的分布及表達變化，以探討TLR4在黏膜免疫中發(fā)揮作用的機制。研究結果顯示：LPS處理組較生理鹽水注射組小腸內(nèi)的TLR4表達強烈，其分布規(guī)律大致相同，主要分布于黏膜固有層，其中腸腺周圍及靠近上皮的固有層內(nèi)表達量較多，實驗結果還發(fā)現(xiàn)在腸上皮有較強的TLR4陽性信號表達，進一步驗證了腸上皮、黏膜固有層以及腸腺是腸黏膜免

6、疫的主要場所，另外，也證實了外源性病原微生物入侵時，TLR4與腸黏膜固有層、腸腺及上皮處所介導的免疫反應作用密切，在維持腸道正常生理功能上發(fā)揮著一定的作用。
　　 3、嗜銀細胞在雞小腸內(nèi)的分布規(guī)律
　　 本研究采用鍍銀染色法觀察雞小腸內(nèi)嗜銀細胞的分布及變化規(guī)律，探討神經(jīng)內(nèi)分泌與免疫的關系。研究結果顯示：嗜銀細胞在各日齡階段雞小腸內(nèi)均有表達，且隨著日齡的增加呈現(xiàn)“波浪式”的變化規(guī)律，即：1-3周齡的嗜銀細胞不斷增加，至4、

7、5周齡減少，6周齡又有一個顯著的增加趨勢，嗜銀細胞主要分布于腸黏膜固有層，多散在分布，也有一些分布較為集中，嗜銀細胞的形態(tài)各異，呈梭形的細胞多分布于靠近上皮的固有層內(nèi)，而圓形及不規(guī)則圓形的細胞則多集中于中央固有層及腸腺周圍固有層。較多的嗜銀細胞的分布位置及細胞形態(tài)與TLR4的實驗結果一致。這一結果提示我們，嗜銀細胞在腸道內(nèi)發(fā)揮著免疫細胞相類似的免疫保護作用，而發(fā)揮作用的機制有可能是通過神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌網(wǎng)絡及TLR4共同調(diào)節(jié)的。

8、　　 4、LPS刺激對雞小腸內(nèi)嗜銀細胞的影響
　　 為了探究嗜銀細胞與黏膜免疫的關聯(lián)作用，本實驗通過鍍銀染色法來觀察注射LPS后雞小腸內(nèi)嗜銀細胞的變化規(guī)律，以進一步探討嗜銀細胞與黏膜免疫的關系。實驗結果顯示，LPS處理組腸道內(nèi)嗜銀細胞較生理鹽水處理組顯著增多，主要還是分布在腸黏膜固有層，除了細胞數(shù)量有所增加外，細胞形態(tài)、分布位置等也都存在一些變化，如十二指腸中的梭形細胞數(shù)量增多，細胞質(zhì)內(nèi)的顆粒性物質(zhì)較多的指向腸腔，空腸及回腸中