TLR4乙?；贕DM發(fā)病機制中的作用研究.pdf

1、背景：
　　妊娠期糖尿?。╣estational diabetesmellitus，GDM)是妊娠期常見的并發(fā)癥，給孕婦和胎兒的健康帶來了極大的危害，包括感染、羊水過多、巨大胎兒、胎兒生長受限、胎兒畸形率增加等。目前認為，胰島素抵抗（insulin resistant，IR）、胰島功能受損所致的胰島素相對分泌不足是GDM發(fā)生的主要病因，孕婦體內(nèi)慢性低度炎癥狀態(tài)參與了胰島功能損傷和IR的形成。近年來，炎癥在GDM發(fā)病中的作用已成為研

2、究的熱點。2006年，我們課題組通過對MBL基因突變的檢測，完成了對GDM炎癥發(fā)病機制的初步研究，研究發(fā)現(xiàn)MBL基因第54位密碼子的點突變可降低血清MBL的濃度，低濃度的MBL可能參與了GDM的發(fā)病，接著我們又從TLR4 mRNA、NF-κB mRNA及炎癥因子的表達及其相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，LPS-TLR4-NF-κB通路激活導(dǎo)致炎癥因子的釋放促使了GDM的發(fā)病。
　　目的：
　　在前期研究的基礎(chǔ)上，本研究將觀察TLR4乙?；?/p>

3、正常孕婦、GDM孕婦外周血單核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）內(nèi)的表達情況，從LPS-TLR4-NF-κB通路的起始點進一步探究GDM的炎癥發(fā)病機制。
　　方法：
　　抽取正常孕婦、GDM孕婦晨起靜脈血15ml，最終各取30例，F(xiàn)icoll淋巴細胞分離液經(jīng)密度梯度離心法分離PBMC并保留血清，血清用于檢測內(nèi)毒素的含量，PBMC培養(yǎng)48h后加入終濃度為1ug/ml的脂多糖（l

4、ipopolysaccharide，LPS）干預(yù)培養(yǎng)，建立―炎癥模型；干預(yù)培養(yǎng)24h后收獲細胞并分離上清。TLR4乙?；谋磉_采用免疫沉淀法和Western blot法檢測；NF-κB p65的表達采用Western blot法檢測；上清液中炎癥因子TNF-α、IL-1、IL-10的水平采用ELISA法檢測。
　　結(jié)果：
　　1.GDM孕婦血清LPS（0.92±0.03）IU/ml水平高于正常孕婦（0.53±0.02）IU/

5、ml，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.GDM孕婦體內(nèi)外周血單核細胞發(fā)生TLR4乙?；兓Ｔ袐D體內(nèi)則未檢測到TLR4乙?；陌l(fā)生。
　　3.LPS干預(yù)培養(yǎng)，建立―炎癥模型后,正常+LPS組、GDM+LPS組TLR4乙?；?、NF-κB p65的表達增加，且GDM+LPS組明顯高于GDM組和正常+LPS組。各組TLR4乙?；cNF-κB蛋白表達量之間具有正相關(guān)性（rGDM組=0.901，r正常+LPS組=0.

6、870，rGDM+LPS組=0.942）。
　　4.正常組、GDM組、正常+LPS組、GDM+LPS組炎癥因子的表達水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義，TNF-α的表達：45.49±0.81、55.97±2.84、52.48±1.39及62.55±0.87；IL-1的表達：53.82±5.13、75.92±1.18、73.60±0.99及89.08±2.93；IL-10的表達：21.01±0.51、31.42±1.52、28.77±0.63及3