水牛PCNA和FSHR等基因在卵泡發(fā)育過程中表達模式的初步研究.pdf

1、水牛出生時卵巢中含有約數(shù)萬個原始卵泡，但在水牛生命周期中只有約200個卵泡可以發(fā)育成熟并排卵，約99.9％的卵泡在生長過程中閉鎖、退化。如何挖掘母水牛的繁殖潛能，開發(fā)并應(yīng)用卵巢中的腔前卵泡，是水牛生殖生理研究的重要課題。本研究的目的是對水牛不同時期腔前卵泡中候選基因的表達進行檢測，總結(jié)其表達特點及差異，為探明水牛卵泡發(fā)生的分子機制，優(yōu)化水牛腔前卵泡體外培養(yǎng)系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。現(xiàn)將相關(guān)研究結(jié)果總結(jié)如下。
　　 1.水牛PCNA蛋白和VA

2、SA蛋白在卵巢組織中的表達定位研究。采用石蠟切片結(jié)合免疫組化的方法，對水牛PCNA蛋白和VASA蛋白在卵巢組織不同時期卵泡中的表達情況進行定位研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，(1)原始卵泡中，PCNA和VASA蛋白在顆粒細(xì)胞并未檢測到表達，卵母細(xì)胞中有表達;(2)初級卵泡中，PCNA和VASA在卵母細(xì)胞和部分顆粒細(xì)胞中均可檢測到較低表達;(3)次級卵泡中，PCNA和VASA在卵母細(xì)胞和大多數(shù)的顆粒細(xì)胞中均可檢測到表達，但VASA在卵母細(xì)胞核中未表達;(

3、4)在有腔卵泡中，PCNA在顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞及卵母細(xì)胞周圍的卵丘細(xì)胞中均有很強的表達，而VASA在這些細(xì)胞中均未檢測到表達;隨著卵泡的增長，PCNA蛋白的表達有明顯的上升趨勢，而VASA在各時期卵泡中的表達有明顯差異。
　　 2.水牛不同時期腔前卵泡中PCNA、FSHR、IGFR-1、IGF-Ⅱ、IGFR-2、FGF-2、FGFR-2 mRNA的表達研究。分離水牛原始卵泡、初級卵泡和次級卵泡，應(yīng)用QRT-PCR的方法檢測了其

4、mRNA在不同時期腔前卵泡中的表達變化。結(jié)果顯示:(1) PCNA在各級腔前卵泡中均有表達，且表達量呈上升趨勢，初級卵泡中的表達量顯著高于原始卵泡(1.63±0.09 vs1±0.01，P＜0.05)，次級卵泡中的表達量約為原始卵泡中的43倍，且極顯著高于初級卵泡（43.50±0.14 vs1.63±0.09 vs1±0.01，P＜0.01），與免疫組化結(jié)果一致。(2) FSHR在水牛原始卵泡中未能檢測到表達，在次級卵泡中的表達量顯著高

5、于初級卵泡（1.64±0.09 vs1±0.10，P＜0.05）。(3) IGFR-1在各級腔前卵泡中均有表達，且呈上升趨勢，其中初級卵泡中的表達量顯著高于原始卵泡（1.93±0.004vs1±0.07，P＜0.05），而次級卵泡中的表達量極顯著高于原始和初級卵泡，且約為原始卵泡的12倍（12.07±0.02 vs1.93±0.004 vs1±0.07，P＜0.01）。(4) IGF-Ⅱ在各級腔前卵泡中均有表達，且呈上升趨勢，其中次級卵

6、泡和初級卵泡中的表達量顯著高于原始卵泡（5.59±0.46 vs3.60±0.35 vs1±0.40，P＜0.05），次級卵泡與初級卵泡中的表達量無顯著差異(P＞0.05); IGFR-2在各級腔前卵泡中的表達量呈上升趨勢，其中次級卵泡中的表達量極顯著高于原始卵泡和初級卵泡的表達（10.74±0.01 vs1.24±0.07 vs1±0.05，P＜0.01），后兩者之間無顯著差異。(5) FGF-2在各級腔前卵泡中均有表達，且呈下降趨勢

7、，其中原始卵泡中的表達量顯著高于初級和次級卵泡（1±0.16 vs0.60±0.18 vs0.51±0.09，P＜0.05），而初級卵泡和次級卵泡中的表達量無顯著差異;FGFR-2在各級腔前卵泡中均有表達，且呈上升趨勢，其中次級卵泡中的表達量顯著高于原始和初級卵泡，而初級卵泡中的表達量又顯著高于原始卵泡中的表達量（2.74±0.16 vs1.47±0.09 vs1±0.05，P＜0.05）。上述結(jié)果表明，隨著卵泡的發(fā)育，F(xiàn)SHR、IGF