三丁基錫對(duì)孔雀魚(Poecilia reticulata)性征和生殖的影響及機(jī)制研究.pdf

1、三丁基錫(tributyltin, TBT)是一種有機(jī)錫化合物，能夠引起腹足類的性畸變，造成雌魚的雄性化，具有潛在的類雄/抗雌激素活性，并導(dǎo)致魚類精子數(shù)減少、受精成功率顯著下降等一系列生殖損傷，但作用機(jī)制尚不清楚?？兹隔~的性別二色性和雄魚的生殖行為被認(rèn)為是評(píng)估環(huán)境內(nèi)分泌干擾作用的敏感且直觀的指標(biāo)。因此，本文選擇性成熟的全紅白子孔雀魚為研究對(duì)象，采用與個(gè)體生殖力有直接因果關(guān)系的效應(yīng)生物標(biāo)志物來(lái)評(píng)價(jià)三丁基錫對(duì)孔雀魚性征和生殖行為的潛在危害，

2、以產(chǎn)仔數(shù)和后代仔魚畸形率為指標(biāo)來(lái)確定三丁基錫在種群水平對(duì)孔雀魚生殖的影響，并從芳香化酶(P450 aromatase, P450arom) mRNA表達(dá)、雄激素睪酮(testosterone, T)、雌激素17β-雌二醇(estradiol, E2)分泌等角度探討三丁基錫產(chǎn)生生殖毒性的內(nèi)分泌干擾作用機(jī)制。
　　(1)5 ng/L、50 ng/L、500 ng/L三丁基氯化錫(tributyltin chloride, TBTCl)

3、暴露孔雀魚28天，通過(guò)測(cè)定皮膚中橙色面積和皮膚總面積計(jì)算顏色指數(shù)。結(jié)果表明：50 ng/L、500 ng/L TBTCl暴露使雌魚皮膚顏色指數(shù)顯著增加，雄魚皮膚顏色指數(shù)無(wú)明顯變化，三丁基錫對(duì)雌性孔雀魚表現(xiàn)出類雄/抗雌激素活性。
　　(2)5 ng/L、50 ng/L、500 ng/L TBTCl暴露雌性孔雀魚28天，采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)卵巢組織中芳香化酶 mRNA表達(dá)水平，采用放射免疫分析法(radioimmunoassay

4、, RIA)檢測(cè)了魚體性激素含量。結(jié)果表明：500 ng/L TBTCl暴露組雌魚卵巢中cyp19a mRNA表達(dá)顯著降低，抑制芳香化酶將T轉(zhuǎn)化為E2的過(guò)程，導(dǎo)致雌魚E2顯著降低。
　　(3)5 ng/L、50 ng/L、500 ng/L TBTCl暴露雄性孔雀魚28天，采用RIA檢測(cè)雄魚體內(nèi) T含量，通過(guò)測(cè)定生殖足長(zhǎng)度和總體長(zhǎng)計(jì)算生殖足指數(shù)。結(jié)果表明：50 ng/L TBTCl暴露使雄魚T含量升高，導(dǎo)致雄魚生殖足指數(shù)增加，三丁基

5、錫對(duì)雄性孔雀魚表現(xiàn)出類雄激素活性。
　　(4)5 ng/L、50 ng/L、500 ng/L TBTCl暴露雄性孔雀魚28天，采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測(cè)腦中芳香化酶mRNA表達(dá)水平，采用RIA檢測(cè)雄魚體內(nèi)E2含量，通過(guò)錄像分析統(tǒng)計(jì)雄魚對(duì)雌魚的生殖行為。結(jié)果表明：各暴露組雄魚腦中的cyp19a和cyp19b mRNA表達(dá)量均顯著下降，魚體E2含量隨TBTCl暴露濃度的升高呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，最終抑制雄魚的S型展示、追逐、停駐三種生殖

6、行為。
　　(5)對(duì)雄性孔雀魚生殖行為的抑制對(duì)產(chǎn)仔數(shù)沒(méi)有影響，但最終導(dǎo)致 F1代畸形率顯著增加，主要表現(xiàn)為脊柱彎曲和卵黃囊腫。
　　綜上所述，本文從分子水平(cyp19a和cyp19b mRNA表達(dá)、性激素水平)、組織/器官水平上(性腺指數(shù)、顏色指數(shù)、生殖足指數(shù))、個(gè)體水平(S型展示、追逐、停駐等生殖行為)、種群水平(產(chǎn)仔數(shù)和后代畸形率)等不同生物學(xué)水平，研究了三丁基錫對(duì)雌性、雄性孔雀魚的生殖毒性和內(nèi)分泌干擾作用，證實(shí)了三丁