反義3α-HSD-CR基因轉(zhuǎn)化水稻的研究.pdf

1、隨著植物細(xì)胞全能性的發(fā)現(xiàn)和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的迅猛發(fā)展，越來越多的轉(zhuǎn)基因植物出現(xiàn)在人們的視野里，在關(guān)注轉(zhuǎn)基因植物帶來的巨大經(jīng)濟(jì)效益的時(shí)候，同時(shí)也出現(xiàn)了一些轉(zhuǎn)基因植物安全性方面的問題，加上至今轉(zhuǎn)基因植物的安全性還沒有科學(xué)的定論，其安全性問題更加受到人們的重視。目前有關(guān)轉(zhuǎn)基因植物安全性基礎(chǔ)研究的數(shù)據(jù)十分有限，且在安全性方面主要是以預(yù)防為主，而在轉(zhuǎn)基因植物出現(xiàn)安全性問題后進(jìn)行及時(shí)治理方面的基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)幾乎是空白。
　　本研究將本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的含

2、反義3α-HSD/CR基因的農(nóng)桿菌，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入到含正義3α-HSD/CR基因且遺傳性狀穩(wěn)定的水稻中，同時(shí)用本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的3α-HSD/CR基因的原核表達(dá)載體來獲得蛋白和多克隆抗體，并對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻中的3α-HSD/CR蛋白的表達(dá)量和其降解膽固醇效率進(jìn)行分析檢查。得到以下結(jié)果：
　　1、對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法浸染水稻明恢86愈傷體系中的乙酰丁香酮（AS）和培養(yǎng)溫度進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后的AS濃度為300μg/L；培養(yǎng)溫度為31℃。

3、>　　2、優(yōu)化含pET29a-3α-HSD/CR載體的大腸桿菌表達(dá)體系，優(yōu)化后的條件為：IPTG的誘導(dǎo)濃度為0.6 mmol/L；誘導(dǎo)溫度為31℃；培養(yǎng)時(shí)間為12h。
　　3、對(duì)獲得的多克隆抗體進(jìn)行效價(jià)檢測(cè)，效價(jià)達(dá)到1:5000。
　　4、對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻的根進(jìn)行ELISA檢測(cè)，以非轉(zhuǎn)基因水稻為對(duì)照，檢測(cè)結(jié)果：水稻A的表達(dá)量為對(duì)照的2.4倍；水稻B的表達(dá)量與對(duì)照差異不顯著；水稻C的表達(dá)量與對(duì)照差異不顯著。
　　5、通過對(duì)轉(zhuǎn)