轉(zhuǎn)3α-HSD基因水稻后代遺傳特性以及對(duì)土壤細(xì)菌影響研究.pdf

1、以農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)3α-HSD基因的水稻為試驗(yàn)材料,采用分子手段、農(nóng)藝性狀及品質(zhì)性狀考察,從時(shí)間和空間的角度,檢測(cè)轉(zhuǎn)基因后代的遺傳特性；通過對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻種植土壤中分離得到的以膽固醇為碳源的細(xì)菌的種群鑒定,研究轉(zhuǎn)基因水稻對(duì)種植環(huán)境細(xì)菌種群的影響。探討轉(zhuǎn)3α-HSD基因水稻后代的遺傳性狀的穩(wěn)定性和種植環(huán)境的安全性為此轉(zhuǎn)基因水稻育種價(jià)值做初步研究。現(xiàn)得出主要結(jié)果如下:
　　 1.經(jīng)轉(zhuǎn)3α—HSD基因水稻T4、T5、T6代數(shù)據(jù)分析,可以看出

2、后代轉(zhuǎn)基因的陽(yáng)性植株出現(xiàn)頻率基本穩(wěn)定,平均可以達(dá)到90％以上,說(shuō)明該基因可以穩(wěn)定遺傳；在根部,花粉和籽粒中都檢測(cè)到目的基因,說(shuō)明目的基因在水稻各個(gè)部位都穩(wěn)定存在。
　　 2.轉(zhuǎn)3α—HSD基因水稻分蘗期、孕穗期和抽穗期的檢測(cè)結(jié)果顯示,根部的目的蛋白在世代間隨著生長(zhǎng)發(fā)育期逐漸有穩(wěn)定的趨勢(shì),T5代和T6代差異不顯著。隨生長(zhǎng)發(fā)育含量慢慢增加,抽穗期的含量最高,平均高達(dá)2.56μg／g,分蘗期含量最低,低至0.79μg／g。不同株系的世

3、代間表現(xiàn)為,部分可以穩(wěn)定遺傳,第1株系表達(dá)量高,平均為1.79μg／g,第5株系的表達(dá)量是最低的,平均為1.389μg／g；花粉和籽粒中目的蛋白的含量比較少,單位為ng／g,小一個(gè)數(shù)量級(jí)。花粉中目的蛋白T5代和T6代無(wú)顯著差異,表明是逐漸穩(wěn)定。籽粒中目的蛋白含量在株系間的穩(wěn)定性趨勢(shì)良好,總體看第1株系的含量相對(duì)較高。
　　 3.品質(zhì)性狀分析表明,籽粒中的可溶性淀粉與可溶性蛋白質(zhì)含量與對(duì)照相比都是減少的,谷甾醇與對(duì)照相比含量也是減

4、少的,表明3α-HSD基因的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)谷甾醇有降解作用,證明微生物基因轉(zhuǎn)導(dǎo)植物后仍然能行使其作用,其中第1株系谷甾醇含量是最低的,可溶性淀粉和可溶性蛋白質(zhì)含量與對(duì)照沒有明顯變化,表明它既能達(dá)到轉(zhuǎn)基因的目的又能對(duì)受體品質(zhì)影響最小,結(jié)合2中根部目的蛋白的檢測(cè)結(jié)果可知第1株系分子檢測(cè)與品質(zhì)性狀有相對(duì)應(yīng)的關(guān)系。
　　 4.對(duì)農(nóng)藝性狀的考察表明,轉(zhuǎn)基因外部表形性狀基本穩(wěn)定,劍葉長(zhǎng),劍葉寬,穗長(zhǎng),世代株系間都穩(wěn)定,千粒重,結(jié)實(shí)率和株高世代間

5、穩(wěn)定,有效分蘗是在株系間穩(wěn)定,農(nóng)藝性狀測(cè)定項(xiàng)目都顯示穩(wěn)定。轉(zhuǎn)基因水稻農(nóng)藝性狀的整體表現(xiàn)是株高相對(duì)較高,千粒重增加但結(jié)實(shí)率降低,說(shuō)明籽粒比較飽滿,但是存在空粒的比較多。
　　 5.花粉中檢測(cè)的目的基因條帶比較弱,檢測(cè)的3α-HSD蛋白含量比較低,說(shuō)明該基因通過花粉途徑擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)較低,詳細(xì)判斷花粉的安全性,可以建立擴(kuò)散模型進(jìn)一步研究。
　　 6.土壤中分離得到以膽固醇為碳源的細(xì)菌,三種土壤中不同的菌種初步鑒定都是大腸桿菌。轉(zhuǎn)基