轉(zhuǎn)TR1基因水稻及后代的耐熱性遺傳分析.pdf

1、目前培育出的耐熱性的水稻品種的農(nóng)藝性狀多數(shù)不佳，難以直接利用，因此通過(guò)植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)將耐熱基因轉(zhuǎn)入水稻，并對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻的耐熱性和農(nóng)藝性狀等指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，這對(duì)培育出在生產(chǎn)上有應(yīng)用價(jià)值的耐高溫水稻品種有重要意義。
　　 TRI基因是從甘藍(lán)型油菜中成功克隆出的一個(gè)可提高植物熱脅迫抗性的耐熱基因，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明能夠提高油菜的耐熱受性。本研究通過(guò)對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入TR1基因的粳稻品種日本晴的T0代和T1代再生植株進(jìn)行耐熱性遺傳分析，實(shí)驗(yàn)取

2、得了以下結(jié)果：1.對(duì)日本晴T0代和T1代轉(zhuǎn)基因再生植株進(jìn)行PCR驗(yàn)證，其中254株T0代轉(zhuǎn)基因植株中獲得TRl+Hyg的PCR雙陽(yáng)性植株155株，陽(yáng)性檢出率為61.02％,67株T1代中獲得59株，陽(yáng)性檢出率占88.06％。2.對(duì)11株T0代PCR陽(yáng)性植株進(jìn)行熒光定量實(shí)時(shí)PCR分析，結(jié)果表明TR1基因在11株轉(zhuǎn)基因植株中表達(dá)，但在轉(zhuǎn)基因植株內(nèi)的表達(dá)量存在差異，最高值為7.89,最低值為0.81，這可能和插入的拷貝數(shù)和插入的位點(diǎn)有關(guān)系。3

3、.對(duì)轉(zhuǎn)基因植株T1代自交種子進(jìn)行潮霉素抗性發(fā)芽實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：抽取的31個(gè)轉(zhuǎn)基因株系中有14個(gè)株系T1代植株的自交種子潮霉素抗感分離比符合3:1，遵循孟德?tīng)枂位蝻@性遺傳規(guī)律。T0代轉(zhuǎn)基因水稻葉片的潮霉素抗性結(jié)果與PCR結(jié)果一致率達(dá)85％以上。4.通過(guò)花粉活力測(cè)試、電導(dǎo)率檢測(cè)和葉片脯氨酸含量檢測(cè)這三個(gè)指標(biāo)比較了轉(zhuǎn)基因植株與非轉(zhuǎn)基因植株在熱脅迫和熱沖擊處理下的耐受性，結(jié)果表明：熱脅迫處理后，對(duì)照的花粉平均染色率(max:70％)都低于轉(zhuǎn)基

4、因水稻(max:85.64％)；對(duì)照和轉(zhuǎn)基因水稻相對(duì)電導(dǎo)率都有所上升，脅迫第5天野生型相對(duì)電導(dǎo)率比未脅迫時(shí)增加了59.33％，轉(zhuǎn)基因僅增加了10％左右；高溫處理轉(zhuǎn)基因T0和T1代，轉(zhuǎn)基因植株脯氨酸含量均比非轉(zhuǎn)基因植株高，葉片脯氨酸含量比對(duì)照高出近30％。初步說(shuō)明TR1基因能提高水稻的耐熱能力。5.對(duì)T0代和T1代水稻株高、穗長(zhǎng)、千粒重和結(jié)實(shí)率等重要性狀進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示：與對(duì)照相比，多數(shù)T0代和T1代水稻農(nóng)藝性狀產(chǎn)生了不同程度的變異，