北方部分省市番茄黃化曲葉病毒的檢測(cè)鑒定及辣椒分離物侵染性克隆構(gòu)建.pdf

1、番茄黃化曲葉病毒病（Tomatoyellowleafcurlvirusdisease）是番茄生產(chǎn)中的一種毀滅性病害。番茄黃化曲葉病毒病于2006年在上海、江蘇和浙江等省蔬菜種植區(qū)相繼被發(fā)現(xiàn)，隨后從南方各省迅速擴(kuò)展至北方的山東、河南、河北、北京、內(nèi)蒙古等地的保護(hù)地蔬菜種植區(qū)，在番茄生產(chǎn)上造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。隨著PCR技術(shù)、血清學(xué)檢測(cè)、滾環(huán)擴(kuò)增等技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)番茄黃化曲葉病毒病有了一定的認(rèn)識(shí)，并采取了相關(guān)措施減少經(jīng)濟(jì)損失。為了更好的了

2、解番茄黃化曲葉病毒病的發(fā)生區(qū)域、寄主范圍及其變異方向等，我們于2011年至2012年對(duì)中國(guó)北方河南、山東、河北、天津、吉林、內(nèi)蒙古等省份進(jìn)行了番茄黃化曲葉病毒病的調(diào)查，采集樣品擴(kuò)增全序列，對(duì)其分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1.通過雙生病毒通用引物對(duì)樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)，選取陽(yáng)性樣品使用番茄黃化曲葉病毒特異引物擴(kuò)增全長(zhǎng)并測(cè)定序列。利用軟件處理序列后發(fā)現(xiàn)，獲得的序列全長(zhǎng)為2781個(gè)核苷酸，DNA-A共編碼6個(gè)開放閱讀框，病毒鏈編碼2個(gè)開

3、放閱讀框，編碼AV1(CP)和AV2，反義互補(bǔ)鏈有4個(gè)開放閱讀框，編碼AC1（Rep）、AC2、AC3和AC4，以及開放閱讀框AV2和AC1之間(對(duì)應(yīng)核苷酸2617-147nt)的一個(gè)長(zhǎng)313nt非編碼的基因共同區(qū)(intergenicregion，IR)。
　　2.選取GenBank中全國(guó)各個(gè)地區(qū)的番茄黃化曲葉病毒分離物進(jìn)行相似性比對(duì)，結(jié)果表明所測(cè)得序列與以色列株系Tomatoyellowleafcurlvirus-Israel

4、(TYLCV-IL)相似性最高，為97.2％～98.3％。進(jìn)化樹表明，我國(guó)北方大部分地區(qū)的番茄黃化曲葉病毒分離物屬于Tomatoyellowleafcurlvirus-Israel，并且分為3個(gè)亞組。對(duì)山東、河南、河北省TYLCV序列分析，發(fā)現(xiàn)TYLCV在這三個(gè)省處于一種平衡狀態(tài)，基因交流頻繁。
　　3.在山東省辣椒植株中發(fā)現(xiàn)番茄黃化曲葉病毒，為了分析其對(duì)辣椒、番茄等作物的致病性，采用基因克隆方法，構(gòu)建侵染性克隆pCAMBIA03