建蘭花葉病毒廣東分離物分子特征與侵染性克隆構(gòu)建.pdf

1、蘭花(Cymbidium spp.)清幽脫俗極具觀賞價值和收藏價值，近年來，隨著社會的進(jìn)步，蘭花越來越受到人們的重視，同時，蘭花也是是廣東順德等地的高效創(chuàng)匯產(chǎn)業(yè)。但是，病毒病嚴(yán)重危害著蘭花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。蘭花病毒病可造成蘭花花葉、壞死以及花朵變色和畸形，嚴(yán)重影響其品質(zhì)，其中建蘭花葉病毒(CymMV)是造成蘭花經(jīng)濟(jì)損失的主要病毒之一。
　　本研究獲得了三個建蘭花葉病毒分離物，分別標(biāo)記為 CymMV-GDFS1、CymMV-GDFS2、C

2、ymMV-GDFS3。三個分離物基因組全長序列分別由6227、6222、6224個堿基組成，各包含5個開放閱讀框，分別為4254bp的RdRp、702bp的TGB1、339bp的TGB2、276bp的TGB3、以及672bp的CP基因。對這三個分離物的的全基因組核苷酸序列相似性進(jìn)行分析，結(jié)果表明CymMV-GDFS1與CymMV-GDFS2相似性最低為98.1％，CymMV-GDFS2與CymMV-GDFS3相似性為98.5%，CymM

3、V-GDFS1與CymMV-GDFS3相似性最高為99.3%。與已報導(dǎo)的其它12個CymMV全長序列相比較，相似性在87.3%-97.3%之間；與 Hawaii的兩個分離物 CymMV-18-30、CymMV-18-1的相似性都較低，分別為87.3%與88.5%；而與除此之外的其它10個分離物的相似性在96%-97.3%之間。這三個CymMV CP基因序列與54個國內(nèi)CymMV CP序列相比較，核苷酸與氨基酸的相似性分別為86%-99%

4、、91%-100%；與57個國外CymMV CP序列相比較，核苷酸與氨基酸的相似性分別為88%-99%、90.5%-100%。根據(jù)111個CymMV CP序列分別構(gòu)建核苷酸和氨基酸系統(tǒng)進(jìn)化樹，核苷酸進(jìn)化樹分析表明 CymMV-GDFS1與 CymMV-FS4親緣關(guān)系最近，而 CymMV-GDFS2、CymMV-GDFS3與CymMV-DEK30親緣關(guān)系最近；氨基酸進(jìn)化樹表明CymMV-GDFS1與CymMV-FS4親緣關(guān)系同樣最近、Cy

5、mMV-GDFS3與CymMV-ZH2親緣關(guān)系最近、CymMV-GDFS2與CymMV-C-LZ02親緣關(guān)系最近，而三個分離物之間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。這三個分離物RdRp序列與已報導(dǎo)的12個CymMV RdRp序列相比較，相似性為87.3%-97.9%。
　　本研究通過分段克隆的方法將獲得的三個CymMV分離物成功地連接到改造后的植物雙元表達(dá)載體pCAMBIA2300，構(gòu)建了含有CymMV病毒序列的侵染性克隆，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)分別接種本生