Al-8810對水牛卵母細胞體外成熟和早期胚胎發(fā)育作用的研究.pdf

1、奶牛75-80％的繁殖損失是早期胚胎死亡引起的，40％以上的胚胎損失發(fā)生在妊娠早期的8-17天。研究表明，早期妊娠與體內(nèi)前列腺素F2α(PGF2α)的分泌密切相關(guān)。本研究從體內(nèi)和體外研究PGF2α受體抑制劑(AL-8810)對水牛受胎率、黃體形態(tài)和功能、卵母細胞和早期胚胎發(fā)育的影響，探討其調(diào)控水牛卵母細胞和早期胚胎發(fā)育的作用及機制，對養(yǎng)牛生產(chǎn)實踐中降低早期胚胎損失和提高繁殖率具有理論和實踐意義。主要研究結(jié)果如下所示:
　　 1.

2、PTGFR mRNA在不同發(fā)育階段水牛IVF胚胎中的表達水平
　　 研究發(fā)現(xiàn)PTGFR mRNA在各個發(fā)育階段的水牛IVF胚胎中均有表達。在4-16細胞期PTGFR mRNA表達量顯著高于未受精的裸卵，桑椹胚細胞的PTGFRmRNA表達量顯著低于裸卵時期和極顯著低于4-16細胞期。
　　 2.PTGFR在水牛卵母細胞和IVF胚胎中的表達定位
　　 本研究通過免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)在水牛卵母細胞及IVF胚胎中存在PTG

3、FR的染色體表達定位。
　　 3.AL-8810對水牛卵母細胞體外成熟與凋亡的作用
　　 不同濃度(100nM、200nM、400nM、800nM、1600nM)的AL-8810對水牛卵母細胞體外核成熟均無顯著影響。高濃度處理組(1600nM)的早期凋亡率顯著高于對照組(63.57％ vs.27.02％);各濃度處理組的中晚期凋亡率均低于對照組，其中高濃度處理組(1600nM)中晚期凋亡率僅為7.35％，顯著低于其余各組

4、。但是卵母細胞發(fā)育能力檢測試驗的結(jié)果卻與此相反，高濃度處理組(800nM、1600nM)的桑椹胚率明顯低于低濃度處理組(100nM)，差異顯著。
　　 4.AL-8810對水牛IVF胚胎的作用
　　 在不同時間(0-48h、48-96h、96-144h)，分別用100nM、200nM、400nM、800nM、1600nM的AL-8810處理，胚胎發(fā)育至16-細胞期的數(shù)量有顯著增加。其中，0-48h和48-96h各濃度處理

5、組效果顯著優(yōu)于96-144h組(70.09％，73.43％vs.56.76％)和對照組，最優(yōu)的處理組合為0-48h-800nM(88.67％)和48-96h-400nM(85.00％)。在16-細胞期(96h)之前用AL-8810處理，桑椹胚率比之后有增高的趨勢，但差異不顯著，其中48-96h-800nM(50.00％)處理組合所得到的桑椹胚率明顯高于其它各組。PGF2α受體抑制劑處理96h之前的胚胎相比，之后的有較高的囊胚率(3.61

6、％，2.78％ vs.1.39％)。AL-8810處理可以抑制水牛IVF胚胎PTGFR的mRNA表達水平，并具有濃度依賴性，高濃度處理組(400nM、800nM、1600nM)和對照組(0 nM)之間差異顯著。
　　 5.AL-8810對水牛黃體形態(tài)與功能的作用
　　 在人工輸精后，以人工輸精的方式，將已用PBS稀釋的AL-8810(5000nM)送入子宮開口處。AL-8810處理對水牛黃體直徑大小無顯著影響，對血中主要