巰基物質(zhì)對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟及體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的影響.pdf

1、巰基物質(zhì)在卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)中是一種重要的成分，雖然在實(shí)驗(yàn)中已有人使用，但并沒(méi)有系統(tǒng)的對(duì)巰基物質(zhì)的種類(lèi)，使用的劑量等對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)的影響研究過(guò)。本實(shí)驗(yàn)主要研究半胱氨酸，谷胱甘肽(GSH)，β-巰基乙醇，巰基乙胺對(duì)延邊黃牛卵母細(xì)胞的體外成熟及體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的影響，從而提高延邊黃牛體細(xì)胞克隆的效率。利用屠宰后剪取牛卵巢，用抽吸法回收卵母細(xì)胞，然后在不同種類(lèi)，濃度巰基物質(zhì)中進(jìn)行卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)，最后將成熟的卵母細(xì)胞經(jīng)

2、核移植所構(gòu)建的重組胚進(jìn)行體外培養(yǎng)。得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1.在成熟液中添加不同濃度的半胱氨酸對(duì)延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟影響的試驗(yàn)中，添加0.56mmol／L組顯著高于其它各組（P<0.05），所以確定0.56mmol／L是單獨(dú)使用半胱氨酸時(shí)最適合于延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟的最佳濃度。
　　2.在成熟液中添加不同濃度的GSH對(duì)延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟影響的試驗(yàn)中，1.0mmol／L和1.5mmol／L兩組之間差異不顯著（P＞

3、0.05），但與其它組比較差異顯著（P<0.05），且1.0mmol／L組最高。所以確定1.0mmol／L是單獨(dú)使用GSH最適合于延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟的最佳濃度。
　　3.在成熟液中添加不同濃度的β-巰基乙醇對(duì)延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟影響的試驗(yàn)中,添加100umol／L與150umol／L兩組之間差異不顯著（P＞0.05），但與其它各組比較差異顯著（P<0.05），所以確定100umol／L是單獨(dú)使用β-巰基乙醇最適合于延邊黃

4、牛卵母細(xì)胞體外成熟的最佳濃度。
　　4.在成熟液中添加不同濃度的巰基乙胺對(duì)延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟影響的試驗(yàn)中，添加100umol／L組與50umol／L組，150umol／L組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于對(duì)照組和200umol／L組，所以確定100umol／L是單獨(dú)使用巰基乙胺時(shí)最適合于延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟的最佳濃度。
　　5.在成熟液中聯(lián)合添加已確定濃度的藥品對(duì)延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟影響的試驗(yàn)中，半胱氨酸

5、和巰基乙胺聯(lián)合添加組與半胱氨酸和β-巰基乙醇聯(lián)合添加組之間差異不顯著（P＞0.05），但都顯著高于對(duì)照組和GSH組（P<0.05），所以確定半胱氨酸和巰基乙胺聯(lián)合添加最適合于延邊黃牛卵母細(xì)胞體外成熟。
　　6.在成熟液中添加不同濃度的半胱氨酸對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆效率影響的試驗(yàn)中，在卵裂率方面，0.56mmol／L組與0.28mmol／L組，0.84mmol／L組差異不顯著（P＞0.05），但與對(duì)照組和1.12mmol／L組差異顯著

6、（P<0.05），說(shuō)明0.56mmol／L組最高；在囊胚率上，添加藥物組之間差異不顯著（P＞0.05），但0.56mmol／L組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），所以確定0.56mmol／L是單獨(dú)使用半胱氨酸時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆的最佳濃度。
　　7.在成熟液中添加不同濃度的GSH對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆效率影響的試驗(yàn)中，在卵裂率上，1.0mmol／L與1.5mmol／L組之間差異不顯著（P＞0.05），但1.0mmol／L組顯著

7、高于其他各組（P<0.05），說(shuō)明1.0mmol／L是卵裂的最佳濃度；在囊胚發(fā)育率上，添加藥物組之間差異不顯著（P＞0.05），但1.0mmol／L組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），所以確定1.0mmol／L是單獨(dú)使用GSH時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆的最佳濃度。
　　8.在成熟液中添加不同濃度的β-巰基乙醇對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆效率影響的試驗(yàn)中，在卵裂率上，100umol／L組與50umol／L組，150umol／L組差異不顯著（

8、P＞0.05），但與對(duì)照組和200umol／L組差異顯著（P<0.05），所以確定100umol／L是卵裂的最佳濃度；在囊胚發(fā)育率上，添加藥物組之間差異不顯著（P＞0.05），但100umol／L組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），所以確定100umol／L是單獨(dú)使用β-巰基乙醇時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆的最佳濃度.
　　9.在成熟液中添加不同濃度的巰基乙胺對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆效率影響的試驗(yàn)中，在卵裂率上，添加100umol／L組

9、與50umol／L組，150umol／L組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于對(duì)照組和200umol／L組，說(shuō)明100umol／L效果最佳；在囊胚發(fā)育上，添加藥物組之間差異不顯著（P＞0.05），但100umol／L組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。所以確定100umol／L是單獨(dú)使用巰基乙胺時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆的最佳濃度。
　　10.在成熟液中聯(lián)合添加已確定濃度的藥品對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆效率影響的試驗(yàn)中，在卵裂率方面，