利用siRNA技術(shù)干擾豬GSTM2基因表達(dá)的初步研究.pdf

1、無義密碼子介導(dǎo)的mRNA降解是真核生物體內(nèi)一種重要的mRNA質(zhì)量監(jiān)督機(jī)制。該機(jī)制能夠特異性的識別和選擇性的降解含有提前終止密碼子的mRNA，防止具有潛在危害作用的截斷蛋白的產(chǎn)生，改變由提前終止密碼子引起的某些疾病的癥狀和遺傳方式。谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶由兩個同源二聚體亞基組成，是生物體內(nèi)一種重要的二相解毒酶，其中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶mu亞基對豬胚胎的著床具有調(diào)控作用而影響母豬的繁殖性能。研究發(fā)現(xiàn)豬GSTM2基因發(fā)生無義突變形成含有提前終止

2、密碼子的mRNA，使得GSTM2基因的mRNA發(fā)生了NMD現(xiàn)象，缺失了GSTM2的功能可能會導(dǎo)致豬胚胎的死亡或出生后夭折。為研究NMD現(xiàn)象在豬胚胎生長發(fā)育過程中的作用，試驗采用RNA干擾技術(shù)離體模擬GSTM2基因功能缺失，從而開展與之相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄組研究。研究結(jié)果如下:
　　 1.設(shè)計合成了三對GSTM2基因的siRNA序列，并利用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將三對siRNA片段轉(zhuǎn)染豬睪丸細(xì)胞和豬腎細(xì)胞。經(jīng)熒光檢

3、測后，豬腎細(xì)胞與豬睪丸細(xì)胞相比較具有較高的轉(zhuǎn)染率。
　　 2.利用實時定量PCR在mRNA水平上檢測GSTM2基因的表達(dá)量，結(jié)果顯示GSTM2基因的表達(dá)量在豬睪丸細(xì)胞和豬腎細(xì)胞中都出現(xiàn)了顯著的下調(diào)(p＜0.01)。豬腎細(xì)胞由于轉(zhuǎn)染率較高，其基因抑制率也較高。
　　 3.利用實時定量PCR在干擾24h、48h、72h后分別檢測GSTM2基因的表達(dá)量。結(jié)果顯示在干擾24 h后兩種細(xì)胞內(nèi)的GSTM2基因表達(dá)量達(dá)到最低。72 h