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1、C1assifiedIndex:Confidential(yes/no):noCode:10224NO1105283DissertationfortheMasterDegreeDetectionofgeneticaUy^巫伽genecopyl1●■■‘nUmDerannIntegratlonSlteSCandidate:LiBinSupervisor:ProfLiuDiDegreeCategoI了:MasterofAgriculture
2、CoUege:AnimalScienceandTechnologyFirstleVeldiscipline:AnimalHusbandrySecondleVeldiscipline:AnimalGeneticsandBreedingHarbinChinaJune2014東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學碩士學位論文221豬MC4R基因的克隆與測序10222重組質(zhì)粒pcDNA31()MC4R的構(gòu)建。12223重組質(zhì)粒pcDNA31()MC4R細胞轉(zhuǎn)染及陽性
3、檢測1223RealtimePcR方法對外源基因拷貝數(shù)的檢測15231RealtimePCR15232標準曲線的建立1624利用LMPCR檢測外源基因的整合位點16241接頭引物及特異性引物序列設計16242基因組的酶切與純化。17243純化后的基因組DNA連接接頭17244兩輪PCR擴增檢測18245克隆測序與序列比對193結(jié)果與分析2031轉(zhuǎn)豬Mc4R基因小鼠整合位點檢測2032pcDNA31()Mc4R質(zhì)粒的構(gòu)建21321民豬的M
4、C4R基因的克隆2l322pcDNA31()MC4R質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定2333轉(zhuǎn)染細胞陽性檢測24331豬PKl5細胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染效果24332轉(zhuǎn)染細胞的陽性檢測2434絕對定量PCR對陽性轉(zhuǎn)染細胞外源基因拷貝數(shù)的檢測25341絕對定量標準曲線25342外源基因拷貝數(shù)的檢測2735外源基因整合位點的檢測28351細胞基因組的酶切與純化。28352兩輪PCR擴增檢測28353特異性條帶克隆測序及比對294討論3241質(zhì)粒的構(gòu)建。3242陽性
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