基于Real-Time Q PCR方法的轉(zhuǎn)基因小麥根際土壤中兩種真菌數(shù)量變化的分析.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用使轉(zhuǎn)基因作物種植面積不斷加大，因此對轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)行安全性評價顯得尤為重要。根際土壤微生物是生態(tài)系統(tǒng)中的重要參與者，它的消長影響著植物病害的發(fā)生。本研究對轉(zhuǎn)基因抗病毒、抗毒素、抗旱小麥根際土壤中鐮刀菌、禾谷多黏菌含量進(jìn)行絕對定量，建立了實(shí)時熒光定量PCR(Real-Time Q PCR)檢測體系。應(yīng)用該反應(yīng)體系，對轉(zhuǎn)基因小麥各個生長時期的鐮刀菌、禾谷多黏菌拷貝數(shù)進(jìn)行絕對定量。由于土壤中微生物成分較多且很復(fù)雜，且土壤真菌DN

2、A的提取一直是真菌分子生態(tài)學(xué)上研究所面臨的難題。使用常規(guī)的方法難以對其進(jìn)行純培養(yǎng)，不能有效的反映出全部微生物的變化形態(tài)，并且對經(jīng)純培養(yǎng)的菌定量不能反映自然狀態(tài)菌的真實(shí)含量。因此我們采用分子生物學(xué)的方法，提取土壤真菌總DNA后，再對其中的鐮刀菌、禾谷多黏菌進(jìn)行Real-Time Q PCR擴(kuò)增定量，從而得到這兩種菌的數(shù)量（拷貝數(shù)），以此來分析轉(zhuǎn)基因小麥根際土壤中這兩種菌的數(shù)量變化。
　　 通過不同方法對土壤中真菌DNA進(jìn)行提取，發(fā)

3、現(xiàn)使用試劑盒Ⅱ(UltraCleanTM soilDNA Isolation Kit)方法所提土壤真菌總DNA的質(zhì)量較高，條帶清晰。
　　 對小麥根際土壤中鐮刀菌、禾谷多黏菌進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR定量后，與非轉(zhuǎn)基因小麥對比可以看出，轉(zhuǎn)基因小麥對鐮刀菌的整體抑制作用總體不顯著，鐮刀菌在小麥的整個生長時期呈正態(tài)分布曲線。其中轉(zhuǎn)TaDREB4基因抗旱小麥(TB4)株系與轉(zhuǎn)Tril01基因小麥(DS)株系對鐮刀菌有一定的抑制作用，而高抗