整合子在表皮葡萄球菌中的分布及苦參堿對Ⅰ類整合酶基因表達(dá)量影響的研究.pdf

1、整合子在表皮葡萄球菌中的分布及苦參堿對I類整合酶基因表達(dá)量影響的研究StudyonthedistributionofintegronsandmatrineonclassIintegrasegeneexpressionamongStaphylococcusEpidermidis選題來源：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31260624)學(xué)位申請人：禿霞指導(dǎo)教師：周堂童教援合作指導(dǎo)教師：值玉龍副教援申請學(xué)位門類級(jí)別：理堂亟專研所論文完成日期：20

2、15年4月名方學(xué)業(yè)究在摘要金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌是引起奶牛乳房炎的主要致病菌，而表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis，Se)被認(rèn)為致病能力弱的條件致病菌，一般不引起奶牛乳房炎疾病的爆發(fā)。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)表皮葡萄球菌極易在奶牛乳房環(huán)境中形成生物被膜，形成的生物被膜是金黃色葡萄球菌耐藥株的儲(chǔ)備庫，這些生物特點(diǎn)導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性上升并呈現(xiàn)多重藥耐藥性特征。研究表明，細(xì)菌整合子系統(tǒng)在細(xì)菌耐藥性形成過程中扮演

3、著重要的角色，它在整合酶的介導(dǎo)下可以直接捕獲外界耐藥基因，使耐藥基因轉(zhuǎn)移擴(kuò)散致使多種類型的耐藥基因盒產(chǎn)生，耐藥基因盒的表達(dá)導(dǎo)致細(xì)菌多重耐藥性的形成。鑒于整合子在細(xì)菌耐藥性形成過程中的重要作用，研究菌株整合子與耐藥性關(guān)系以及藥物對其作用特點(diǎn)，具有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。本研究首先通過藥理學(xué)和分子生物學(xué)手段對分離的臨床型奶牛乳房炎Se進(jìn)行耐藥性和整合子分布特點(diǎn)分析，深入探討整合子與Se耐藥相關(guān)性。分析發(fā)現(xiàn)，臨床分離的Se對臨床常用抗菌藥物的耐

4、藥率為167％～100％，耐藥譜廣，呈多重耐藥的特點(diǎn)，所有分離株對青霉素的耐藥率最高；通過對細(xì)菌整合子流行特征研究，I類整合子的檢出率為60％，II類整合子的檢出率為167％，菌株中未檢查出IⅡ類整合子。其中產(chǎn)膜se中I類整合子檢出率為714％，不產(chǎn)膜Se中I類整合子的檢出率為565％。且在Se中，I類整合子陽性菌株的耐藥率大于陰性菌株。從結(jié)果中可以看出Se中I類整合子的檢出率最高，并且和Se的耐藥性有一定相關(guān)性；在含有I類整合子的Se

5、中耐藥基因盒的檢出率為778％，并發(fā)現(xiàn)每個(gè)耐藥基因盒至少攜帶兩個(gè)耐藥基因，其中氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶、二氫葉酸還原酶、氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶是最常見的耐藥基因。在se中，I類整合子攜帶的基因盒陽性菌株耐藥種數(shù)高于基因盒陰性菌株，說明整合子攜帶的耐藥基因盒與細(xì)菌產(chǎn)生多重耐藥性有密切關(guān)聯(lián)。同時(shí)研究了生物被膜菌和浮游茵中I類整合酶基因的表達(dá)量，以及藥物對I類整合酶基因表達(dá)量的影響。結(jié)果表明，生物被膜菌和浮游菌中均有I類整合酶基因的表達(dá)，且生物被膜菌I

6、類整合酶基因的表達(dá)量均高于浮游菌，隨著生物被膜的不斷加厚I類整合酶基因的表達(dá)量也不斷升高。生物被膜密度的增大，可能會(huì)影響整合子捕獲耐藥基因的頻率，有利于耐藥基因的擴(kuò)散?？鄥A對產(chǎn)膜Se的MIC高于或等于不產(chǎn)膜Se的MIC，并且苦參堿對Se生物被膜有抑制作用。苦參堿對se的生物被膜茵和浮游菌兩種生長狀態(tài)下的I類整合酶基因有調(diào)控作用，可以下調(diào)I類整合酶基因的表達(dá)量，其中對浮游菌生長狀態(tài)下I類整合酶基因下調(diào)最大。提示苦參堿能夠降低I類整合子傳