獺兔毛囊發(fā)育規(guī)律及不同被毛密度獺兔皮膚組織差異基因的篩選.pdf

1、本研究旨在探討獺兔毛囊發(fā)育過(guò)程:描述胚胎時(shí)期，不同胎齡獺兔毛囊發(fā)育規(guī)律;對(duì)出生后4d以及胚胎期24d的不同被毛密度的獺兔皮膚進(jìn)行差異基因的篩選。研究結(jié)果如下:
　　(1)選取正常生長(zhǎng)母獺兔8只，選用同一只種公兔進(jìn)行配種，以配種當(dāng)天為第0天。分別在胚胎時(shí)期19d、20d、21d、22d、23d、24d、25d、26d，取胚胎兔臀部皮膚，通過(guò)HE染色方法，研究不同胚胎期獺兔毛囊的發(fā)育規(guī)律;以GAPDH為內(nèi)參基因，利用Q-RT-PCR檢

2、測(cè)生長(zhǎng)激素受體(GHR)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子5(FGF5)基因在不同胎齡毛囊中的表達(dá)量。HE染色結(jié)果顯示:獺兔胚胎期毛囊發(fā)育主要集中在20～25胎齡;19胎齡時(shí)毛囊發(fā)育未啟動(dòng)，20、21胎齡時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)毛囊釘球，但數(shù)目稀少;22胎齡時(shí)出現(xiàn)較多的毛囊釘球，基板增厚;23、24胎齡時(shí)毛囊發(fā)育最活躍，毛乳頭長(zhǎng)度大于寬度并且毛囊內(nèi)根鞘向上延伸;25胎齡時(shí)毛囊基本發(fā)育成型。熒光定量結(jié)果顯示:不同胎齡GHR基因表達(dá)差異極顯著(P＜0.0001)，呈現(xiàn)

3、由低到高、然后降低的趨勢(shì);不同胎齡FGF5基因表達(dá)無(wú)差異表達(dá)(P=0.6644)，基因表達(dá)倍數(shù)趨勢(shì)平穩(wěn)。
　　(2)選取成年被毛密度高的母獺兔（被毛密度＞14000根/cm2）、成年被毛密度低的母獺兔（被毛密度＜10000根/cm2）各四只，分成兩組，選用同一只種公兔進(jìn)行配種。于出生后4d時(shí)，每只母兔隨機(jī)選取4只仔獺兔，割取臀部皮膚，利用家兔全基因組芯片篩選不同被毛密度獺兔差異基因，并運(yùn)用聚類(lèi)及功能注釋對(duì)芯片檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果

4、顯示:本試驗(yàn)共篩選出188個(gè)與獺兔被毛密度相關(guān)的差異基因，表達(dá)上調(diào)的基因有72個(gè)，其中包含24個(gè)已知功能的基因，表達(dá)下調(diào)的基因116個(gè)，其中包含38個(gè)已知功能的基因。GO分類(lèi)顯示，大部分差異基因位于細(xì)胞質(zhì)膜、細(xì)胞外區(qū);屬于氧化還原酶、特定細(xì)胞因子類(lèi)分子;主要涉及氧化還原、脂代謝分解等生物學(xué)過(guò)程。KGGE通路分析顯示，篩選的差異基因主要參與了WNT信號(hào)通路、PPAR信號(hào)通路、維生素合成與代謝途徑等。Q-RT-PCR結(jié)果與基因芯片結(jié)果基本吻

5、合，基因芯片結(jié)果可靠。
　　(3)選取成年被毛密度高的母獺兔（被毛密度＞14000根/cm2）、成年被毛密度低的母獺兔（被毛密度＜10000根/cm2）各四只，分成兩組，選用同一只種公兔進(jìn)行配種，以配種當(dāng)天為第0天，于胚胎時(shí)期24d時(shí)屠宰母兔，每只母兔隨機(jī)選取4只胚胎獺兔，割取臀部皮膚，利用家兔全基因組芯片篩選不同被毛密度獺兔差異基因，并運(yùn)用聚類(lèi)及功能注釋對(duì)芯片檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示:本試驗(yàn)共篩選出1342個(gè)與獺兔被毛密度相關(guān)

6、的差異基因，表達(dá)上調(diào)的基因有950個(gè)，其中包含350個(gè)已知功能的基因，表達(dá)下調(diào)的基因392個(gè)，其中包含164個(gè)已知功能的基因。GO分類(lèi)顯示，大部分差異基因位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)膜;屬于受體、DNA結(jié)合類(lèi)分子;主要涉及G蛋白耦合受體信號(hào)通路、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、運(yùn)輸?shù)壬飳W(xué)過(guò)程。KGGE通路分析顯示，篩選的差異基因主要參與了Shh信號(hào)通路、Eph信號(hào)通路、幾種氨基酸（如脯氨酸、精氨酸、色氨酸等）代謝、亞油酸代謝、維生素合成與代謝途徑以及鈣信號(hào)通路等