外源微生物誘導(dǎo)家蠶幼蟲(chóng)血液黑化以及黑色素代謝中間產(chǎn)物分析.pdf

1、家蠶作為一種重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)，在我國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中占有重要地位，但是家蠶容易遭受多種病原物的侵襲，往往給國(guó)家和農(nóng)民造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。家蠶是節(jié)肢動(dòng)物中的重要模式昆蟲(chóng)，節(jié)肢動(dòng)物沒(méi)有像哺乳動(dòng)物那樣完善的獲得性免疫防御系統(tǒng)，當(dāng)有外源物侵染時(shí)，它們只能依靠先天性免疫防御系統(tǒng)進(jìn)行廣譜性應(yīng)答。因此，研究家蠶先天免疫防御機(jī)制對(duì)提高家蠶抗病能力和推動(dòng)蠶業(yè)發(fā)展具有重要的理論意義，此外，研究家蠶的免疫防御機(jī)制對(duì)于推進(jìn)鱗翅目其他昆蟲(chóng)相關(guān)研究也具有重要意義，也可為鱗

2、翅目害蟲(chóng)的防治提供借鑒。
　　黑色素沉積在入侵病原體的表面是節(jié)肢動(dòng)物進(jìn)行免疫應(yīng)答的主要表現(xiàn)之一，黑化反應(yīng)是否參與節(jié)肢動(dòng)物的免疫防御早就引起了人們的關(guān)注，學(xué)者們也進(jìn)行了很多的關(guān)于昆蟲(chóng)黑化免疫機(jī)制的研究，主要集中在果蠅和蚊子。目前關(guān)于家蠶先天性免疫的研究報(bào)道主要集中在抗菌肽、信號(hào)通路、以及模式識(shí)別蛋白受體等方面，而關(guān)于家蠶黑化免疫的報(bào)道還相對(duì)較少。本文通過(guò)對(duì)家蠶幼蟲(chóng)血液體外顏色變化觀察、外源微生物誘導(dǎo)家蠶幼蟲(chóng)血液黑化分析、以及微生物侵

3、染對(duì)幼蟲(chóng)血液中黑色素代謝中間產(chǎn)物含量的影響等實(shí)驗(yàn)來(lái)探索家蠶黑化反應(yīng)在免疫防御過(guò)程中扮演的角色。主要研究結(jié)果如下:
　　1.家蠶幼蟲(chóng)血液體外變化觀察本研究使用的毛細(xì)針可以在很大程度上阻斷外界空氣與針管內(nèi)物質(zhì)的接觸。家蠶幼蟲(chóng)血液在毛細(xì)針中可以保持透明狀較長(zhǎng)時(shí)間。我們?cè)谌N不同的溫度(37℃、室溫、4℃)條件下觀察毛細(xì)針中壯蠶時(shí)期的血液顏色變化。結(jié)果顯示:4齡第一天血液顏色變黑變深速度最慢，5齡第六天變黑變深速度最快，有隨著幼蟲(chóng)食桑生長(zhǎng)

4、血液顏色變黑變深速度逐漸加快的特點(diǎn);在不同的溫度條件下，37℃高溫下血液變黑最快，變黑變深現(xiàn)象也最明顯，室溫次之，4℃低溫條件下最慢，血液變黑速度和明顯程度有隨著溫度的降低逐漸減弱的特點(diǎn)。
　　2.外源微生物誘導(dǎo)家蠶幼蟲(chóng)血液黑化分析用大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白僵菌三種微生物，以微生物:血液體積比為1∶2、1∶1和2∶1三種比值在毛細(xì)針中觀察4齡第三天和5齡第六天幼蟲(chóng)血液顏色變化。結(jié)果顯示:當(dāng)有外源微生物時(shí)，血液顏色變黑變深的速度明

5、顯加快;5齡幼蟲(chóng)血液變黑速度比4齡幼蟲(chóng)血液變黑速度快;當(dāng)外源微生物為大腸桿菌時(shí)，血液變黑變深速度最快，現(xiàn)象最明顯，枯草芽孢桿菌次之，白僵菌最慢;微生物:血液體積比為1∶2時(shí)，血液變黑變深速度相對(duì)較快。
　　3.家蠶幼蟲(chóng)血液體外對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響用前述微生物與4齡第三天、5齡第三天和5齡第六天的血液反應(yīng)6h和24h后統(tǒng)計(jì)微生物的生長(zhǎng)情況。結(jié)果顯示:與5齡第六天血液反應(yīng)的微生物生長(zhǎng)最差，5齡第三天次之，4齡第三天生長(zhǎng)相對(duì)較好;與幼蟲(chóng)血

6、液反應(yīng)的大腸桿菌生長(zhǎng)比其它微生物生長(zhǎng)差;微生物:血液體積比值1∶2的微生物生長(zhǎng)比2∶1的生長(zhǎng)差;反應(yīng)6h的微生物比反應(yīng)24h的生長(zhǎng)差。
　　4.免疫誘導(dǎo)對(duì)家蠶幼蟲(chóng)血液中多巴、多巴胺含量影響用大腸桿菌溶液注射5齡第三天幼蟲(chóng)，HPLC檢測(cè)注射后6h和24h幼蟲(chóng)血液中多巴和多巴胺含量。結(jié)果顯示:注射6h后多巴含量有下降趨勢(shì)，注射24h后多巴含量明顯下降;注射大腸桿菌溶液后未檢測(cè)到血液中多巴胺含量明顯變化。
　　綜上結(jié)果認(rèn)為:外源微