兩株滸苔來源微生物的次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、海洋來源的微生物已經(jīng)越來越成為天然產(chǎn)物研究的重點(diǎn)對(duì)象，從中發(fā)現(xiàn)的新天然產(chǎn)物數(shù)量巨大，每年呈遞增的趨勢快速發(fā)展。海洋來源的內(nèi)生微生物更是具有其研究的特殊價(jià)值，因其與宿主進(jìn)行營養(yǎng)爭奪而可能產(chǎn)生一些生物活性優(yōu)秀的化合物，這為新藥研發(fā)提供了一個(gè)很好的方向。為了尋找當(dāng)前急需的藥物研發(fā)先導(dǎo)化合物，本文通過采集青島滸苔以及其他樣品作為內(nèi)生微生物的來源材料，進(jìn)行分離篩選，然后通過化學(xué)和生物活性兩方面的綜合考察，開展了滸苔來源內(nèi)生微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物研究

2、工作。主要內(nèi)容包括:滸苔內(nèi)生真菌及放線菌的分離培養(yǎng)，微生物的發(fā)酵及初步篩選，talent strain的發(fā)現(xiàn)以及進(jìn)一步優(yōu)化發(fā)酵，化合物的分離純化，單體化合物的結(jié)構(gòu)全面解析鑒定，單體化合物的生物活性評(píng)價(jià)。
　　從青島的四大海水浴場（第一海水浴場，第二海水浴場，棧橋海水浴場，石老人海水浴場）采集新鮮滸苔樣品，以及其他海洋來源的樣品，通過梯度稀釋法以及蔗糖密度梯度法分離得到200株微生物。采用pNPG模型進(jìn)行了α-糖苷酶的活性篩選。而后

3、通過TLC，HPLC進(jìn)行化學(xué)方面的考察，最終確定了兩株滸苔來源的微生物作為進(jìn)一步系統(tǒng)研究的“talent strain”—放線菌OUCMDZ3434和真菌OUCMDZ3416。放線菌OUCMDZ3434通過16sRNA進(jìn)行鑒定為鏈霉菌Streptomyces sp.。真菌OUCMDZ3416尚未鑒定。
　　通過不同發(fā)酵影響條件（發(fā)酵時(shí)間，酸堿度，天數(shù)，鹽度等）的考察，全面分析了不同條件下菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物的變化，最終選定了在已考察的

4、條件中表現(xiàn)最好的方法進(jìn)行進(jìn)一步放大發(fā)酵，并對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行了乙酸乙酯的萃取得到粗浸膏。而后通過不同的色譜技術(shù)（硅膠柱色譜，凝膠色譜，大孔樹脂以及高效液相色譜等）對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化，從放線菌OUCMDZ3434中得到了12個(gè)單體化合物(1-12)，從真菌OUCMDZ3416中得到了6個(gè)單體化合物(13-18)。然后通過理化性質(zhì)以及現(xiàn)代波普技術(shù)進(jìn)行了單體化合物的結(jié)構(gòu)解析鑒定，其中有10個(gè)新化合物。所得化合物均為聚酮途徑來源。

5、　　對(duì)放線菌OUCMDZ3434所得化合物進(jìn)行了糖苷酶活性的測試結(jié)果顯示化合物1-6均比陽性對(duì)照藥阿卡波糖的活性好，其中化合物1和2表現(xiàn)了非常優(yōu)秀的活性，IC50分別為19.7和8.31μM，而阿卡波糖則為1.12 mM。
　　綜上所述，本文對(duì)海洋來源的內(nèi)生微生物進(jìn)行了篩選研究，得到了一批活性優(yōu)秀的菌株，并且對(duì)其中的兩株滸苔來源的內(nèi)生微生物進(jìn)行了系統(tǒng)的次級(jí)代謝產(chǎn)物研究，共有18個(gè)化合物被分離鑒定，包括10個(gè)新化合物，其中有2個(gè)為新