維氏氣單胞菌滅活疫苗的制備及其免疫保護效應研究.pdf

1、近年來，維氏氣單胞菌導致水產(chǎn)動物感染，并引起大量死亡。目前對該病的防治主要采取化學藥物，化學藥物不但會對養(yǎng)殖水體造成破壞。還會在魚體內殘留進而影響水產(chǎn)動物品質。目前，利用疫苗防治細菌性疾病，不但環(huán)保且很有效，但在國內有關維氏氣單胞菌滅活疫苗的研究尚未見報道，為此，本試驗對維氏氣單胞菌及其滅活疫苗進行了以下研究:
　　1.維氏氣單胞菌特性及滅活方法研究
　　以維氏氣單胞菌為研究對象，采用肌肉注射、腹腔注射、皮膚損傷感染和浸泡感

2、染4種方式對鯽魚進行人工感染，肌肉注射和腹腔注射的死亡率最高，分別為100％、80％，說明這兩種感染方式效果最好。用不同的甲醛濃度在不同的溫度下制備滅活疫苗，經(jīng)過無菌和安全性檢驗，結果顯示該菌株使用0.2％的甲醛在28℃條件下滅活24h，不但可以達到完全滅活的要求，還能最大程度的保護好免疫原性。在對鯽魚進行急性毒性試驗中，測得該菌株半致死量為1.6×107(cells)。用4×108cfu/mL菌株進行回歸感染試驗，白烏鱧的死亡率為10

3、0％，由此表明該菌株具有較強的毒性。
　　2.維氏氣單胞菌滅活疫苗對鯽魚免疫效應研究
　　將制得的疫苗分為全菌組和佐劑組對鯽魚進行免疫，進行二次免疫并攻毒。測定紅白細胞數(shù)、白細胞分類百分比、白細胞吞噬活性、血清抗體效價和免疫保護力。結果顯示全菌組血清抗體效價在14d是達第一個峰值1∶320，經(jīng)過二次免疫后，抗體效價增加達1∶640，佐劑組血清抗體效價在第28d時達到峰值1∶1280;攻毒后，佐劑組的免疫保護力高于全菌組，分別

4、為93.8％、87.5％。紅細胞數(shù)量變化不大，白細胞數(shù)量呈上升趨勢;單核細胞分類比、中性粒細胞分類百分比、吞噬百分比和吞噬指數(shù)先上升后下降，顯著高于對照組(P＜0.05);血栓細胞有一定下降，但是變化不明顯，顯著低于對照組(P＜0.05);淋巴細胞分類百分比總體呈上升趨勢，與對照組具有顯著差異性(P＜0.05)。免疫器官指數(shù)有上升趨勢，顯著高于對照組(P＜0.05)。以上結果表明維氏氣單胞菌滅活疫苗對鯽魚具有較好的免疫保護效果。

5、　　3.維氏氣單胞菌滅活疫苗對草魚免疫效應研究
　　將制得的疫苗對草魚進行免疫試驗，分為6個組，進行二次免疫并攻毒。測定SOD、CAT、AKP活力、白細胞分類百分比、免疫器官指數(shù)、血清抗體效價和相對免疫保護力。結果顯示4個免疫組血清抗體效價最大值分別為1∶320、1∶640、1∶640、1∶1280，顯著高于對照組(P＜0.05)，相對免疫保護力分別為70.59％、76.47％、88.24％、88.24％，與對照組相比具有顯著差異

6、性(P＜0.05)。三種酶活性在免疫后均出現(xiàn)了增加，在SOD活力方面，佐劑組2顯著高于其余3組（P＜0.05），佐劑組1顯著高于兩個全菌組(P＜0.05)，全菌組2顯著高于全菌組1(P＜0.05)。在CAT活力方面，佐劑組2顯著高于兩個全菌組(P＜0.05)，其余免疫組之間不存在顯著差異性(P＞0.05)。在AKP活力方面，佐劑組2顯著高于其余3組(P＜0.05)，全菌組2顯著高于全菌組1和佐劑組1(P＜0.05)，全菌組1和佐劑組1之

7、間不存在顯著差異性(P＞0.05)。單核細胞分類比和嗜中性粒細胞百分比先上升后下降，佐劑組2單核細胞分類百分顯著高于其余各組(P＜0.05)，佐劑組1中性粒細胞分類百分比顯著高于其余各組（P＜0.05），免疫組與對照組相比具有顯著差異性（P＜0.05）;血栓細胞變化不大，淋巴細胞含量增加顯著高于對照組(P＜0.05);免疫器官指數(shù)有上升趨勢，顯著高于對照組(P＜0.05)。以上結果表明維氏氣單胞菌滅活疫苗可以提高草魚的免疫保護效果，添加