二種益生菌對軍曹魚幼魚生長性能、免疫酶和消化酶活性、腸道菌群結構及TLR9基因表達量的影響.pdf

1、本實驗旨在研究持續(xù)性和非持續(xù)投喂枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌及其復合菌對軍曹魚幼魚生長性能、免疫酶、消化酶、腸道菌群結構及TLR9基因表達量的影響，為益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應用提供指導。
　　選取平均體重為22.0±0.15g的健康軍曹魚幼魚840尾，隨機分成7個處理(組號:T0、T1、T2、T3、T4、T5、T6)，每處理3重復，重復40尾魚。T0組投喂基礎飼料，T1、T2、T3組前30d分別投喂含枯草芽孢桿菌1×107cfu/g、

2、嗜酸乳桿菌1×107cfu/g、含枯草芽孢桿菌+嗜酸乳桿菌(1∶1)2×107cfu/g的飼料，后20d投喂基礎飼料;T4、T5和T6組分別投喂T1、T2、T3組飼料50d，分別在0d、10d、20d、30d、40d、50d檢測各實驗組血清LZM、SOD、ACP和AKP活性;在0d、30d、50d時獲取軍曹魚的腸道，通過高通量測序技術和PCR-DGGE技術分析其腸道菌群結構與多樣性，并對優(yōu)勢菌群進行物種注釋。在實驗結束時稱重，計算各處理

3、組的生長性能，并測定肝臟和腸道淀粉酶、蛋白酶活性，測定軍曹魚TLR9基因在肝臟、腎臟、脾臟和腸道中的表達量。
　　結果表明:T0、T1和T2組的WGR無顯著差異(P＞0.05)，且低于T3-T6組，T6組有最大值，顯著高于其它各組。SGR的趨勢與WGR類似。T2-T6組的FCR顯著優(yōu)于對照組(P＜0.05)，T4和T6組有最佳值，顯著低于其它各組(P＜0.05)。
　　7個實驗處理組的血清LZM在整個實驗期里呈先上升后降低趨

4、于平穩(wěn)，在10d時有最大值，顯著高于其它時間點(P＜0.05);添加益生菌處理組的血清LZM顯著高于對照組(P＜0.05);在第10d和30d時，益生菌添加組之間LZM無顯著差異（P＞0.05）;在第20d時，T3和T6組顯著高于其它組(P＜0.05);在第40d時，T2和T3組顯著高于其它各組(P＜0.05);在第50d時，T1-T6各組有顯著差異(P＜0.05)，且以T6的值最高。
　　血清T-SOD同樣呈現(xiàn)先上升后降低趨于平

5、穩(wěn)的趨勢，在20d時達到最大值;在第10d時，T1-T6組顯著高于對照組(P＜0.05)，但各組間無顯著差異(P＞0.05);而在第20d時，益生菌添加組結果與第10d類似，但T6顯著高于T1和T5組(P＜0.05);在第30d時，除T2和T5組顯著低于對照組(P＜0.05)外，其它組與對照組無顯著差異;在第40d時，T2和T3組顯著低于對照組，其它組與對照組無顯著差異（P＞0.05）;在第50d時，T4-T6組顯著高于T0-T3組，且

6、以T6組T-SOD最佳。
　　血清AKP呈先上升后下降的趨勢，且在第40d時除T1和T3組略有降低，其它組均達到最大值;在第10d時，T1-T6組顯著低于對照組(P＜0.05)，但彼此間無顯著差異;在第20d時，各組無顯著差異(P＞0.05），而在30d、50d時，T1-T6組顯著低于對照組(P＜0.05);在第40d時，除T2和T4組與對照組無顯著差異外，其它組顯著低于對照組(P＜0.05)。
　　血清ACP同樣呈現(xiàn)先上升

7、后下降的趨勢，且在第20d時達到最大值;在第10d時，除了T3和T6組，其它組顯著高于對照組(P＜0.05)，且T1和T4顯著高于其它組;在第20d時，T1和T4組與對照組無顯著差異，其它組顯著高于對照組(P＜0.05);在第30d時，T1和T4與對照組無顯著差異，其它組顯著低于對照組(P＜0.05);在第40d時，T1-T6組顯著低于對照組，且T6顯著高于T3和T4組(P＜0.05);在第50d時，T1和T2組顯著高于T0組(P＜0.

8、05)，而T6與對照組無顯著差異(P＞0.05)，其它組顯著低于對照組。
　　T1-T6組肝臟淀粉酶活性顯著高于對照組(P＜0.05)，且以T6組為最高，相反T1-T6中腸淀粉酶活性顯著低于對照組，且以T5組為最低;T5和T6組前腸淀粉酶活性顯著高于對照組及其它各組(P＜0.05);T4組后腸淀粉酶活性與T3和T6無顯著差異（P＞0.05），但顯著高于其它各組。T1-T6組肝臟蛋白酶顯著高于對照組(P＜0.05)，且以T5和T6組

9、最佳;T4-T6組前腸、中腸和后腸蛋白酶顯著高于其它各組（P＜0.05），且以T6組有最大值。
　　軍曹魚幼魚30dT6和50dT6組前腸樣品Shannon指數(shù)顯著高于對照組及其它組(P＜0.05），表明這兩組樣品的菌群多樣性高于其它組;50dT0組樣品與0dY（0d時腸道樣品）、30dT0、50dT6組樣品的beta多樣性指數(shù)具有顯著性差異(P＜0.05)，同樣50dT1組樣品與30dT5、30dT6組的beta多樣性也存在顯著

10、差異。0d與50dT0-T4組前腸優(yōu)勢菌群為發(fā)光桿菌屬，所占菌群比例分別為91.24％、76.77％、75.89％、94.92％、99.56％，而30dT0和30dT5組優(yōu)勢菌群為不動桿菌屬，所占比例分別為73.73％和95.6％，50dT5-T6組優(yōu)勢菌群為沙雷氏菌屬，所占腸道菌群比例為69.85％和62.73％，30dT4和30dT6組優(yōu)勢菌群分別為弧菌屬和葡萄球菌屬，所占腸道菌群比例為89.41％和53.55％。
　　軍曹魚

11、幼魚0d和30d各組后腸樣品條帶數(shù)無顯著差異，平均條帶數(shù)為6.38，T0和T4-T6之間存在共性條帶Band18、Band19，且Band19為優(yōu)勢菌群占比例平均為74.13％，T0與T4、T5、T6組腸道菌群相似性分別為64％、67％、40％;而在50d時，除T3組條帶數(shù)為10.66外，其它組平均條帶數(shù)為15，無顯著差異，T0-T3組之間存在共性條帶10條，其中Band6、28、35和45的條帶為該時期腸道中的主要優(yōu)勢菌群，占比例分別

12、為36.1％、15.75％、15.27％和11.74％，T0與T1-T3組腸道菌群相似性分別為67％、66％、52％; T4-T6組共性條帶10條，其中Band5、32、37和40為優(yōu)勢菌群條帶，平均占比例為42.16％、14.97％、10.36％和10.68％，T4與T5-T6之間腸道菌群相似性為58％、46％和64％。
　　除T2組與對照組無顯著差異(P＞0.05)外，其它各組肝臟TLR9基因表達量均顯著提高，尤其是T4-T6

13、組顯著高于T0-T3組(P＜0.05)，但T4-T6三組之間無顯著差異(P＞0.05);T3-T6組腎臟TLR9基因表達量顯著高于對照組(P＜0.05)，且T6組顯著高于T3-T5組(P＜0.05)，T1和T2組顯著低于對照組(P＞0.05);TLR9基因在脾臟中的表達量趨勢與肝臟類似(P＜0.05);T1-T6組TLR9基因在腸道中的表達量顯著高于對照組(P＜0.05)，T4-T6組間無顯著差異(P＞0.05)，T1-T3組情況與之類