龍勝鳳雞中一株A亞群禽白血病病毒的基因組分析及其對SPF雞的致病性.pdf

1、禽白血病病毒（ALV）被發(fā)現(xiàn)已有一百多年，是最早發(fā)現(xiàn)并深入研究的病毒之一。它也是第一個(gè)被證實(shí)可誘發(fā)腫瘤的病毒，該發(fā)現(xiàn)獲得1996年諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。根據(jù)ALV細(xì)胞受體的特異性和病毒基因組中囊膜蛋白基因?qū)⑵鋭澐譃锳-J等十個(gè)亞群，并由本實(shí)驗(yàn)室在我國地方品系中鑒定到一個(gè)暫名為K的新亞群。ALV-J在各種亞群中流行最為廣泛，致病性最強(qiáng)，給我國養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成了嚴(yán)重影響。但流行病學(xué)調(diào)查同時(shí)表明，感染禽白血病的雞群不單單是由ALV-J引起的，也

2、有一些感染雞群是由ALV-A、B造成的。本研究對于從我國保種的地方品系基因庫中分離鑒定到一株A亞群ALV（ALV-A），在完成其全基因分析基礎(chǔ)上對其致病性開展了系統(tǒng)研究，這有助于了解我國地方品系雞群中ALV-A的分子演變規(guī)律及其致病性，為我國地方品系中ALV凈化提供參考依據(jù)。
　　1、龍勝鳳雞群中ALV-A的分離鑒定及其序列分析
　　為了解中國地方品系雞中ALV的基因組序列特征及變異情況，本研究通過接種DF-1細(xì)胞、間接免疫

3、熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）等方法，從我國特有地方品系龍勝鳳雞某保種雞群種蛋中分離到一株ALV-A，命名為SDAU14A1。通過相互直接重疊的引物對不同基因區(qū)域進(jìn)行了擴(kuò)增和克隆測序，通過拼接獲得了其全基因組。將該序列與不同參考毒株進(jìn)行序列對比，結(jié)果顯示SDAU14A1與日本矮腳雞分離株Tyms_90全基因組同源性最高，其U3區(qū)同源性達(dá)到100％，而與其它中國地方品系雞分離株同源性較低，暗示該毒株可能代表東亞地區(qū)地方品系雞

4、的某種特有毒株類型。該研究展示出我國地方品系雞感染ALV的多樣性，提示我們有必要實(shí)施嚴(yán)格的監(jiān)控和凈化措施，推動我國地方品系雞中ALV的凈化。
　　2、ALV-A分離毒株對SPF雞的致病性研究
　　本實(shí)驗(yàn)選擇卵黃囊接種和1日齡腹腔接種兩種攻毒方式系統(tǒng)研究了SDAU14A1對SPF雞的致病作用，并同時(shí)設(shè)置了橫向傳播組和空白對照組觀察其橫向傳播能力。在1w時(shí)每只雞分別接種0.1mL NDV和AIV-H9滅活疫苗，并于免疫后3w、4

5、w、5w采血，分離血清后以HI試驗(yàn)檢測針對NDV和AIV-H9抗體效價(jià)。第7w時(shí)，各組隨機(jī)選取和剖殺6只雞稱其體重以及法氏囊、胸腺和脾臟的重量，計(jì)算免疫器官指數(shù)（免疫器官重量/體重）。對自然死亡的雞剖檢并觀察，發(fā)生腫瘤的雞將其腫瘤組織制備切片，HE染色后進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。試驗(yàn)結(jié)果顯示，相對于空白對照組，病毒感染組能夠引起更為顯著的生長遲緩和免疫抑制（p<0.05），免疫抑制主要體現(xiàn)在攻毒實(shí)驗(yàn)組的胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著降低以及NDV和