蛛絲蛋白八聚體轉(zhuǎn)基因小鼠的制備及檢測(cè).pdf

1、蛛絲蛋白是蜘蛛腹部絲腺中合成的一種結(jié)構(gòu)特殊的纖維蛋白，因具有質(zhì)量輕、韌性大、超收縮、抗張力強(qiáng)等優(yōu)良特性，具有廣泛的應(yīng)用前景。蛛絲蛋白八聚體是由擬蜘蛛拖絲蛋白基因人工合成的核心序列S經(jīng)翻譯后連接而成的八聚體。為了深入了解8S蛛絲蛋白基因?qū)γl(fā)性能的作用，本實(shí)驗(yàn)采用原核顯微注射技術(shù)，制備蛛絲蛋白八聚體轉(zhuǎn)基因小鼠。通過(guò)PCR及Southern Blot檢測(cè)方法鑒定陽(yáng)性鼠，并通過(guò)Real-time PCR，Western Blot、免疫熒光染色

2、等方法對(duì)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠進(jìn)行表達(dá)檢測(cè)。
　　1.蛛絲蛋白八聚體轉(zhuǎn)基因小鼠的制備與鑒定
　　蛛絲蛋白基因?qū)γl(fā)性能的改善有一定的作用。為了進(jìn)一步探究蛛絲蛋白基因?qū)γl(fā)性能的具體作用及表達(dá)規(guī)律，我們通過(guò)原核注射方法制備蛛絲蛋白基因毛囊細(xì)胞特異性表達(dá)的小鼠。用PCR及Southern Blot鑒定陽(yáng)性鼠，實(shí)驗(yàn)共得到F0代小鼠67只，通過(guò)鑒定，我們得到陽(yáng)性鼠3只，陽(yáng)性率為4.47％。
　　本研究成功制備了蛛絲蛋白八聚體的轉(zhuǎn)基因小

3、鼠，為以后研究該基因的功能創(chuàng)造了實(shí)驗(yàn)條件。
　　2.蛛絲蛋白八聚體轉(zhuǎn)基因小鼠表達(dá)水平的檢測(cè)
　　成功制備轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性鼠后，首先進(jìn)行了mRNA水平的檢測(cè)。通過(guò)Real-timePCR檢測(cè)結(jié)果為:3只陽(yáng)性鼠在mRNA水平都表達(dá)了目的基因，而對(duì)照鼠沒(méi)有目的基因的表達(dá)。然后以α-tubulin為內(nèi)參基因，進(jìn)行蛋白質(zhì)水平的檢測(cè)，所用方法為Western Blot。檢測(cè)結(jié)果為:3只陽(yáng)性鼠在蛋白質(zhì)水平都有目的基因的表達(dá)，對(duì)照鼠沒(méi)有檢測(cè)到目的