檸檬烯對指狀青霉孢子萌發(fā)的作用初探.pdf

1、由指狀青霉（Penicillium digitatumSacc）侵染柑橘引起的綠霉病是最嚴重的柑橘類采后病害，最高可引起90％的采后腐爛損失。在柑橘綠霉病害發(fā)生過程中，油胞受損后釋放的檸檬烯起到了重要作用，但是具體的作用機制還不清楚。本研究以指狀青霉孢子為研究對象，研究了離體和活體條件下檸檬烯對指狀青霉生長的影響，并分析了外源檸檬烯的流向。主要研究內(nèi)容如下：
　?。?）測定了不同數(shù)量級（104個/mL、105個/mL、106個/m

2、L、107個/mL）的指狀青霉孢子濃度和OD值之間的關(guān)系，構(gòu)建標準曲線，在不同的數(shù)量級范圍內(nèi)，其線性關(guān)系良好，可以作為后續(xù)實驗準確定量孢子濃度的依據(jù)。
　?。?）測定了水瓊脂培養(yǎng)基中添加檸檬烯后對不同濃度孢子萌發(fā)率的影響。結(jié)果表明：孢子濃度為106個/mL和107個/mL時，檸檬烯在低濃度下（0-0.50μL/mL）促進孢子萌發(fā)，高濃度（>1.0μL/mL）下抑制其萌發(fā)，最大促進濃度分別為0.25μL/mL和0.50μL/mL。<

3、br>　　（3）測定了液體培養(yǎng)基（PDB）中添加檸檬烯后對不同濃度孢子萌發(fā)率的影響以及萌發(fā)率隨時間的變化。結(jié)果表明：孢子濃度為106個/mL和107個/mL時，檸檬烯在低濃度下（0-0.50μL/mL）促進孢子萌發(fā)，高濃度（>1.0μL/mL）下抑制其萌發(fā)，最大促進濃度分別為0.25μL/mL和0.50μL/mL。研究還發(fā)現(xiàn)，孢子萌發(fā)率隨時間而增加，11 h后萌發(fā)完全。
　?。?）探討了外源添加檸檬烯對柑橘綠霉病進程的影響。結(jié)果表

4、明：自然采摘的柑橘果實在劃破傷口后第4d開始腐爛，第6d達到98.9％，而沒有劃破傷口的柑橘以及消毒后的柑橘始終沒有出現(xiàn)腐爛現(xiàn)象；柑橘油胞傷口上接種指狀青霉孢子并分別培養(yǎng)48h、60h和72h后，柑橘的腐爛直徑分別為2.12cm、3.34cm和6.64cm，顯著高于劃破油胞間隙后的腐爛直徑，分別為1.16cm、1.58cm和4.71cm；在劃破油胞的柑橘果實上添加5μL0.25-2.0μL/mL的檸檬烯能加速綠霉病的發(fā)病過程，誘導菌斑生

5、長，濃度增加至4.0μL/mL時又抑制其發(fā)病；在劃破油胞間隙的柑橘果實上添加5μL0.25-4.0μL/mL的檸檬烯能加速綠霉病的發(fā)病過程，誘導菌斑生長，濃度增加為4.0μL/mL時誘導作用開始減弱；隨著油胞傷口和油胞間隙傷口添加檸檬烯的濃度增大，兩者腐爛直徑的差異逐漸縮小，當檸檬烯濃度為2.0μL/mL時，腐爛直徑達到最大分別為4.95cm和4.98cm，兩者無顯著差異。
　?。?）定性分析了檸檬烯在影響孢子萌發(fā)過程中的物質(zhì)變化

6、。結(jié)果表明：低濃度下（0-0.50μL/mL）檸檬烯不會轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，高濃度下(>1.0μL/mL)有少量轉(zhuǎn)化為α-松油醇。
　　（6）定量分析了檸檬烯促進孢子萌發(fā)過程中孢內(nèi)孢外檸檬烯濃度隨檸檬烯初始添加量的變化。結(jié)果表明：孢子濃度為106個/mL時，檸檬烯濃度達到0.50μL/mL后，孢內(nèi)檸檬烯濃度不再增加。孢子濃度為107個/mL時，檸檬烯濃度達到1.0μL/mL后，孢內(nèi)檸檬烯濃度不再增加。兩種孢子濃度下，孢內(nèi)和孢外檸檬烯濃

7、度之和與初始添加的檸檬烯濃度分別無顯著差異。
　?。?）定量分析了0.25μL/mL檸檬烯促進孢子萌發(fā)過程中孢內(nèi)孢外檸檬烯濃度隨培養(yǎng)時間的變化。結(jié)果表明：孢子濃度為106個/mL時，培養(yǎng)時間達到11h后，孢內(nèi)檸檬烯濃度不再增加。孢子濃度為107個/mL時，培養(yǎng)時間達到7h后，孢內(nèi)檸檬烯濃度不再增加。兩種孢子濃度下，孢內(nèi)和孢外檸檬烯濃度之和與初始添加的檸檬烯濃度分別無明顯差異。
　　本課題證實了一定濃度檸檬烯可以促進指狀青霉孢