檸檬醛對(duì)指狀青霉線粒體的作用初探.pdf

1、指狀青霉(Penicillium digitatumSacc)侵染引起的綠霉病是最嚴(yán)重的柑橘類水果采后病害。檸檬醛，3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醛，廣泛存在于植物精油中，對(duì)多種果蔬采后致病真菌有較強(qiáng)的抑制作用，是一種潛在的天然抑菌物質(zhì)。我們前期研究表明，最小抑菌濃度（MIC，2.0μL/mL）和最小殺菌濃度（MFC，4.0μL/mL）下檸檬醛對(duì)指狀青霉有良好抑菌效果。然而，檸檬醛對(duì)指狀青霉線粒體形態(tài)和功能方面的影響未見報(bào)道。本研

2、究以指狀青霉為研究對(duì)象，探討檸檬醛對(duì)其線粒體形態(tài)和功能相關(guān)指標(biāo)的影響。具體研究指標(biāo)如下：線粒體表面形態(tài)，胞內(nèi)外ATP含量，呼吸代謝，糖酵解途徑（EMP）和三羧酸循環(huán)途徑（TCA）相關(guān)酶活及重要產(chǎn)物含量。主要研究結(jié)果如下：
　　（1）建立了指狀青霉線粒體差速離心提取法，此法提取的線粒體收率為2.2％~3.7％，可用于進(jìn)一步分析。提取結(jié)果及后期驗(yàn)證顯示此方法提取指狀青霉線粒體穩(wěn)定，純度較高。
　?。?）采用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀

3、察了不同濃度檸檬醛作用后指狀青霉線粒體的表面形態(tài)。結(jié)果表明，檸檬醛處理后指狀青霉線粒體表面形態(tài)均發(fā)生了一定變化，且隨著濃度增加，破壞程度也隨之增加。光學(xué)顯微鏡下檸檬醛組較對(duì)照組線粒體數(shù)量增加，出現(xiàn)巨大線粒體；掃描電鏡觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同濃度檸檬醛處理后指狀青霉線粒體形態(tài)差異明顯。對(duì)照組（CK）線粒體形態(tài)豐滿，結(jié)構(gòu)完整，表面呈現(xiàn)規(guī)則的褶皺；MIC檸檬醛處理組指狀青霉線粒體表面凹陷甚至變形；MFC檸檬醛處理組缺乏線粒體基質(zhì)，形狀不規(guī)則，結(jié)構(gòu)無(wú)

4、序，表面粗糙，部分線粒體發(fā)生溶解和出現(xiàn)不規(guī)則增加。
　　（3）用熱提法提取 ATP并用高效液相色譜（HPLC）測(cè)定其含量。結(jié)果表明，檸檬醛處理組指狀青霉 ATP含量較對(duì)照組均發(fā)生了一定變化。經(jīng) MIC和MFC檸檬醛處理30 min的指狀青霉，其胞內(nèi)ATP的含量分別是21.55±0.19和19.21±0.72μg/g，顯著低于對(duì)照組（22.27±0.98μg/g）。在檸檬醛處理指狀青霉菌絲體的整個(gè)過(guò)程中，隨著檸檬醛濃度增加和處理時(shí)間

5、延長(zhǎng)，胞內(nèi) ATP含量越來(lái)越低；胞外ATP含量變化趨勢(shì)則相反。
　　（4）用溶氧儀測(cè)定溶氧量并進(jìn)一步研究了檸檬醛對(duì)指狀青霉呼吸代謝的影響。結(jié)果表明，1/2MIC、MIC和MFC檸檬醛處理指狀青霉后抑制率分別是15.4％，21.2％和30.6％。此外，還測(cè)定了不同濃度檸檬醛（1/2MIC、MIC、MFC）與丙二酸、碘乙酸、磷酸鈉的疊加率，結(jié)果顯示指狀青霉糖酵解途徑和三羧酸循環(huán)途徑受到了檸檬醛的影響。
　?。?）通過(guò)試劑盒測(cè)定E