油菜素內(nèi)酯（BR）超敏感嵌合受體的構(gòu)建和水稻轉(zhuǎn)基因表達(dá).pdf

1、在植物和動(dòng)物中,受體激酶(receptor-like kinases,RLKs)介導(dǎo)了各種各樣的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑.為了知道BRI1是否在BR的識(shí)別過(guò)程中起到了直接的作用,并籍此構(gòu)建一個(gè)人工抗病受體基因的激發(fā)和信號(hào)控制系統(tǒng).He等把BRI1的LRR-JM結(jié)構(gòu)域(domain)與Xa21的絲氨酸/蘇氨酸激酶重組構(gòu)建了一個(gè)嵌合受體的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)NRG1.當(dāng)用油菜素內(nèi)酯處理水稻細(xì)胞株時(shí),這個(gè)嵌合受體可以引發(fā)與XA21相同的植物防衛(wèi)反應(yīng),包括活性

2、氧迸發(fā),防衛(wèi)基因的激發(fā),細(xì)胞死亡等.這個(gè)系統(tǒng)有力證明了BRI1在BR的識(shí)別過(guò)程中的直接作用.而且這個(gè)系統(tǒng)將可以使我們構(gòu)建新的抗病基因,并發(fā)現(xiàn)新的植物受體激酶的配體.為了構(gòu)建一個(gè)更敏感的BR激發(fā)的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng),利用油菜素內(nèi)酯(brassinosteroids,BR)超敏感受體激酶基因Sudl與經(jīng)體外點(diǎn)突變的水稻抗病受體激酶基因Xa21構(gòu)建了一個(gè)帶SUD1 LRR-JM結(jié)構(gòu)域與XA21激酶域(kinase)的合成受體(chimera)基因S

3、NRG1,同時(shí)構(gòu)建了SUD1 LRR突變體對(duì)照受體基因SNRGmL和XA21kinase突變體對(duì)照受體基因SNRGmK.應(yīng)用基因槍(particle bombardment)轉(zhuǎn)化技術(shù)成功將SNRG1,SNRGmL和SNRGmK導(dǎo)入粳稻模式品種臺(tái)北309的胚性愈傷組織中,并由此獲得了再生植株和細(xì)胞株.經(jīng)PCR、Northern blot分子檢測(cè)和表型觀察證實(shí)外源基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入并整合到水稻基因組.防衛(wèi)基因表達(dá)的結(jié)果表明SNRG1可能已在體內(nèi)微