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1、以水稻(Oryza sativa L.)精細胞與二細胞花粉差減文庫中得到的在精細胞中優(yōu)勢表達的克隆作為探針,篩選水稻精細胞cDNA文庫,得到對應(yīng)的兩個全長cDNA克隆.分析表明兩個全長cDNA陽性克隆長度分別為2 278bp和2 437bp,共同擁有一個由579個氨基酸組成的開放讀碼框,分子量為66.7kDa,等電點為4.885.在GenBank中比較顯示與擬南芥的肌球重鏈蛋白有一定的同源性(46﹪),并具有肌球蛋白特征的結(jié)構(gòu)域.用RT
2、-PCR方法進行檢測分析表明此基因在葉、花粉母細胞期幼穗、單細胞花粉、二細胞花粉、成熟花粉、授粉子房和精細胞中均有表達,但在精細胞中表達量遠遠高于其它組織細胞,證明此基因是在水稻精細胞中優(yōu)勢表達的.為了進一步探索RSSG58基因功能,以RSSG58 cDNA為模板,采用RT-PCR和酶切方法得到cDNA片段,反向插入表達載體pFGC5941中,構(gòu)建了可在植物中調(diào)控表達反義RNA基因片段的反義重組表達載體.以根癌農(nóng)桿菌浸漬法侵染擬南芥植株
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