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1、浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文高表達(dá)PGA的枯草芽孢桿菌蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名:張虹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:趙輔昆20091222浙江理T大學(xué)碩七學(xué)位論文ProteomicsAnalysisofBS168OverproducingPGAAbstractBacillussubtilis(Bsubtilis)expressionsystemhasobviousadvantagesoverEcoliexpressionsy
2、stemAcomprehensiveunderstandingofproteomicchangesinBsubtilisoverexpressionexogenousproteinandknowledgeofitsmechanismhelpsguidethereconstructofBsubtilisexpressionsystem,servingtheindustrybettenTodate,thestudyofitsmechanis
3、mtosecretorystressismainlystillontheRNAlevelratherthantheproteinpAcc岬UBll0isaEcoliBSubtilisshuttlevectorconstructedbythislabItincludespgafollowingPamyencodingPenicillinGAcylase(PGA),whichmakingBS168Cansecretorylargequant
4、itiesofPGAinthelogarithmicgrowthphasewiththeinductionofstarchunderthislaboratoryconditions,thequalityofthisrecombinantPGAcanreach16嘰,and10U/mL,increasingbY10foldsthanhuang,and2foldsthanyang,whichprovidingagoodexperimenta
5、lmaterialforthestudyingofsecretorystressresponseInorderteducethelossofintracellularproteins,thispaperusesrelativelysimplesamplepreparationmethod:resuspendingthecollectedbacteriainlysate(whichreferedtoAberdeenandmadesomei
6、mprovement)thenassisted謝t11sonicationBymeasuringthegrowthCUlVesandactivitychiveofcontrol(BS168/pUBl10)andhi曲expressionofPGAbacterial(BS168/pAccpUBll0),thispaperdecidedprepareingatthetimepointof24也andbyproteinconcentratio
7、ndetermination,thispaperdecided150Din500此lysatetoprepare2DEsampleThe2DEpicturesshowsagoodrepeatabilitybysoftwareanalysisTheresultshowsgreatdifferenceindifferentiallyexpressedproteinswithuseofdifferentstripofpH310NLandpH4
8、7Thereale55upregulateproteinsand12downregulateproteinwiththeformerstrip,while18upregulatproteinsand3downregulatewiththelatterWithMALDI—TOF—TOFmassspectrometryanalysis,weidentify6proteins。Fourofthemalecausedbecauseofgrowt
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