45328.釀酒酵母saccharomycescerevisiae與酒酒球菌oenococcusoeni的跨界融合子研究

1、摘要原生質(zhì)體融合技術(shù)始于上世紀(jì)60年代，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動植物和微生物各個領(lǐng)域。該技術(shù)可以克服細(xì)胞壁的天然屏障，排除接合型的限制，實現(xiàn)多基因重組還可打破親緣關(guān)系，有目的地采用生產(chǎn)性狀優(yōu)良的菌株作為親本，來選育理想的融合株，從而加速工業(yè)微生物菌種改良進(jìn)程，為優(yōu)良工業(yè)微生物的選育提供了一個嶄新的途徑。本研究是針對西北農(nóng)林科技大學(xué)葡萄酒學(xué)院獲得的釀酒酵母(sa“haron砂℃escerevisiae)與酒酒球菌(Oenococ姍oeni)s

2、D一Za的跨界融合子F一20一7進(jìn)行了一系列分析鑒定工作，來證明其是否為二親本的跨界融合子，并對其遺傳穩(wěn)定性和其他生產(chǎn)性能做進(jìn)一步研究，為生產(chǎn)推廣提供理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容包括:1.對融合子進(jìn)行生長試驗，發(fā)現(xiàn)其生長過程中延滯期稍長于葡萄酒酵母1450，對數(shù)生長期變短，與親本葡萄酒酵母1450幾乎同時達(dá)到穩(wěn)定期。2.對融合子進(jìn)行抗生素的抗性分析，得出F一20一7對氨節(jié)青霉素不敏感，對放線菌酮比較敏感，抑制劑量為100肚gimL，說明融合子

3、F一20一7的遺傳物質(zhì)主要以葡萄酒酵母為主。3.通過降酸試驗得到融合子F一20一7的平均降解蘋果酸效率為68.54%，最高者可達(dá)到78.81%，說明融合子的降酸性能不穩(wěn)定。4.導(dǎo)致蘋果酸降解發(fā)生的關(guān)鍵酶基因是蘋果酸一乳酸酶基因(mleA)和蘋果酸通透酶基因(mle尸)。本研究首先對融合子的核DNA進(jìn)行該基因的PCR擴(kuò)增，結(jié)果未找到該基因進(jìn)而對質(zhì)粒DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)mleA和腳le尸，并且測序得到mle尸基因與Genbank中該酶

4、基因的同源性高達(dá)97%，較好的解釋了融合子的降酸行為。通過以上工作我們證明了跨界融合的發(fā)生，但是由于相關(guān)基因未能融合到核DNA上而只存在于細(xì)胞器中，所以造成了遺傳性質(zhì)的不穩(wěn)定。因此需要篩選降酸效率高的融合子應(yīng)用于生產(chǎn)，本研究中得到了一株降酸性能高達(dá)78，81%的融合子，可以分離保存?zhèn)溆?。關(guān)鍵詞:融合子降酸葡萄酒酵母酒酒球菌greatdegradationofL一alatecanbewellexPlainedInaword，weProve

5、dthehappenedofthefusionbetweeninterkingdomsaccordingtothisstudy.ButduetothegenewasonthePlasmid，IeadtotheinstabilityofitsdescendiblitySoweneedtoselecttheeficiencyfusant.Inthisstudyweobtainedastrainwhichcoulddegradethemali