48289.人hssad1基因的克隆和特征分析暨hssad1蛋白激酶功能為1433所調節(jié)的機制研究

1、復旦大學博士學位論文人HsSAD1基因的克隆和特征分析暨HsSAD1蛋白激酶功能為1433所調節(jié)的機制研究姓名：葉光明申請學位級別：博士專業(yè)：遺傳學指導教師：談家楨余龍20051030復旦大學博士論文中文搬p““and1433B“叩，驗證了突變了的14_33蛋白不能與HsSADI互作；另一方面發(fā)現用^PPase磷脂酶去除了磷酸化的HsSADI也失去和GSTl4—3—3B互作的能力。我們發(fā)現激酶的活性喪失后則兩者的相互作用消失，同時又發(fā)現

2、HsSADI激酶具有自身磷酸化的特性。這些結果提示HsSADl的自身磷酸化產生了14—3—3蛋白的結合位點。為了確定HsSADl與14—33B的作用區(qū)域，我們將HsSADI蛋白從c端進行缺失突變體的構建。通過互作實驗將HsSADI與1433的互作區(qū)域局限于HsSADI蛋白的349500位氨基酸。最后我們調查了1433蛋白與HsSADI的互作對HsSADI的功能影響。我們發(fā)現細胞中1433i3的過量表達可以抑制HsSADI的激酶活性；重組

3、表達的1433B蛋白也能抑制HsSADI的激酶活性。這些結果表明1433蛋白不但是激酶HsSADI的互作蛋白，同時也是HsSADI活性調節(jié)蛋白。在細胞周期試驗中，我們發(fā)現1433B蛋白能部分減弱HsSADI誘導的G2／M期的阻滯。該結果進一步說明了1433蛋白是HsSADI功能作用的重要調節(jié)蛋白。另外，我們報道了一個新的人類1J旨酰甘油3磷酸一?；D移酶基因AGPAI“7的克隆與特征。卜脂酰甘油一3～磷酸一?；D移酶是真核生物甘油酯類的

4、生物合成中的一個關鍵酶。迄今為止，在人的卜酰基甘油3磷酸一?；D移酶家族中已經報道了6個成員，分別命名為APGATl6。我們發(fā)現的AGPA77基因定位于染色體15q24區(qū)段。該基因編碼524個氨基酸；在123234氨基酸處有一個?；D移酶結構域。人18種組織中的表達譜分析顯示，AGPAT7在子宮，胸腺，胰腺，骨骼肌，膀胱。胃，肺和睪丸組織中有廣泛表達。Hela細胞的亞細胞定位結果顯示該?；D移酶主要定位于細胞內質網上。關鍵詞：HsSAD