48290.大鼠胰腺β細(xì)胞分泌調(diào)控機(jī)制的研究

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文大鼠胰腺β細(xì)胞分泌調(diào)控機(jī)制的研究姓名：萬(wàn)群芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物物理指導(dǎo)教師：徐濤20050429II雖然它們也同時(shí)增加RRP的大小，但增加的程度要比HCSP要小一些。不同的PKC或者PKA抑制劑能夠阻止PMA或fskolin引起的HCSP和RRP的增強(qiáng)效應(yīng)。這表明HCSP代表了一類對(duì)鈣離子高度敏感的分泌過程，并能被PKA和PKC的激活明顯增強(qiáng)，在表觀上表現(xiàn)為增加了分泌對(duì)鈣離子的敏感性。同時(shí)也表明蛋白激酶

2、A和C確實(shí)在胰島素的分泌過程中起重要的調(diào)控作用。用各種不同的PKC亞型的抑制劑處理β細(xì)胞后的結(jié)果表明在胰島素分泌的調(diào)控中，PKCα參與了HCSP增強(qiáng)效應(yīng)的調(diào)節(jié)過程。PKA和PKC對(duì)HCSP的作用并沒有疊加，表明在它們信號(hào)傳遞的下游有著相同的作用機(jī)制。這提示在胰島素的分泌過程中PKA和PKC的作用底物可能相同。通過應(yīng)用細(xì)胞膜去極化和光解釋放鈣離子的聯(lián)合刺激，我們還發(fā)現(xiàn)HCSP是與那些同鈣通道耦聯(lián)的囊泡不同的一類特殊的囊泡庫(kù)。因此我們認(rèn)為P

3、KA和PKC之所以促進(jìn)分泌是因?yàn)樗麄兛梢栽黾痈叨肉}敏感的囊泡數(shù)量。（3）Syntaxin1A(Stx1A)和Munc18a在囊泡的轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞分泌中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。實(shí)驗(yàn)采用Confocal和寬場(chǎng)熒光顯微鏡技術(shù)研究了在胰島素分泌細(xì)胞系INS1以及非分泌細(xì)胞系中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO）中Stx1A和Munc18a的胞內(nèi)定位和相互作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在INS1細(xì)胞膜上Munc18a與Stx1A呈簇狀共定位分布，但是不與Stx1A的氨基端Habc

4、結(jié)構(gòu)域缺失突變體（Stx1AΔHabc）共定位，表明Stx1A的Habc結(jié)構(gòu)域在Stx1A與Munc18a相互作用以及Munc18a在膜上定位中起著至關(guān)重要的作用。在沒有內(nèi)源性Stx1A表達(dá)的CHO細(xì)胞中，EGFP標(biāo)記的Stx1A不能定位到細(xì)胞膜上，即使與Munc18a共表達(dá)也不能定位到細(xì)胞膜上，表明Stx1A轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜并不是必需依賴于Munc18。此外，應(yīng)用FRET技術(shù)檢測(cè)到了EGFPStx1A與Munc18aTdimer2之間的相

5、互作用，但是Stx1ADM（Stx1A的一種能保持開放構(gòu)型的雙點(diǎn)突變體，Stx1AL165AE166A，Stx1ADM）盡管與Munc18a共定位分布，卻沒有觀察到明顯的FRET的發(fā)生，而Munc18aTdimer2與EGFPStx1AΔHabc之間沒有發(fā)生FRET。表明Munc18a與Stx1A以及Stx1ADM之間可能具有不同的作用方式，也證明了Stx1A氨基端Habc結(jié)構(gòu)域在Stx1A與Munc18a之間的相互作用中發(fā)揮著至關(guān)重要