13494.用于擬干酪乳桿菌代謝組學(xué)分析的樣品處理方法研究和應(yīng)用

1、分類號(hào)：幽!旦：墨]密級(jí)：UDC：華東理工大學(xué)學(xué)位論文用于擬干酪乳桿菌代謝組學(xué)分析的樣品處理方法研究和應(yīng)用李曉雪指導(dǎo)教師姓名：王永紅教授華東理工大學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生化工程研究中心申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)名稱：微生物學(xué)論文定稿日期：20130420論文答辯日期：20130602學(xué)位授予單位：華東理工大學(xué)學(xué)位授予日期：御僻6囂2窶答辯委員會(huì)主席：張嗣良教授評(píng)閱人：儲(chǔ)炬教授張毅教授華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文第1頁(yè)用于擬干酪乳桿菌代謝組學(xué)分析樣品的

2、處理方法研究和應(yīng)用摘要用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GasChromatographyMassSpectrometry，GCMS)技術(shù)建立了用于檢測(cè)擬干酪乳桿菌胞內(nèi)代謝物的代謝組學(xué)研究方法。考察了不同溶解劑(吡啶、四氫呋喃、甲氧胺鹽酸鹽)和衍生化試劑(N甲基叔丁基二甲基硅基三氟乙酰胺、N，O雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰三甲基氯硅烷和N甲基N三甲基硅烷基三氟乙酰胺)，對(duì)質(zhì)譜峰的信號(hào)強(qiáng)度和個(gè)數(shù)的影響，確定使用毗啶作為溶解劑、N，O雙(甲基硅烷基)氟乙酰

3、三甲基氯硅烷作為衍生劑的兩步衍生法效果最佳。以擬干酪乳桿菌為分析對(duì)象，共鑒定出49種胞內(nèi)中間代謝物。方法學(xué)考察結(jié)果表明，該方法具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。此外，還采用主成分分析方法對(duì)所獲得的擬干酪乳桿菌發(fā)酵過(guò)程胞內(nèi)代謝產(chǎn)物變化數(shù)據(jù)進(jìn)行了代謝模式識(shí)別研究。本文建立了一個(gè)用于擬干酪乳桿菌代謝組學(xué)研究的樣品滅活和萃取方法。使用單元和多元數(shù)據(jù)分析方法，分析了不同滅活方法(60％甲醇、60％甲醇／09％碳酸銨(pH60)、60％甲醇／09％

4、氯化鈉、40％乙醇／09％氯化鈉和60％甘油／135％氯化鈉)和萃取方法(100％甲醇，70％甲醇，甲醇／氯仿，乙腈／甲醇／水，連續(xù)萃取)作用效果。研究結(jié)果表明發(fā)現(xiàn)60％甲醇／09％氯化鈉滅活效率最高并且能夠有效降低胞內(nèi)代謝物滲出，是最適合的滅活方法。此外，建立了連續(xù)萃取方法，先使用70％甲醇萃取然后再使用乙腈／甲醇／水萃取，此萃取方法的萃取效率最高且重復(fù)性好。此外，本文將建立的GCMS分析方法和代謝組學(xué)研究的樣品處理方法成功用于分析擬

5、干酪乳桿菌發(fā)酵生產(chǎn)乳酸過(guò)程中的代謝變化。乳酸發(fā)酵過(guò)程隨著發(fā)酵進(jìn)行，菌體進(jìn)入穩(wěn)定期后，溶氧往往出現(xiàn)回升現(xiàn)象，同時(shí)乳酸產(chǎn)率和得率都有～定程度的下降。采集溶氧(DissolvedOxygen，DO)回升前后發(fā)酵樣品進(jìn)行代謝物組分析，并采用主成分分析法(PrincipalComponentAnalysis，PCA)對(duì)所獲得的代謝物組數(shù)據(jù)進(jìn)行模式識(shí)別。分析結(jié)果表明，發(fā)酵過(guò)程中伴隨著DO回升，大多數(shù)胞內(nèi)代謝物濃度隨時(shí)間變化發(fā)生顯著性差異，主要是EM