干酪乳桿菌延緩衰老作用初步研究.pdf

1、目的：建立小鼠衰老模型，研究干酪乳桿菌是否具有抗氧化、保護(hù)腸黏膜及調(diào)節(jié)腸道菌群的作用，探索干酪乳桿菌與衰老之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1.動(dòng)物模型建立及分組：昆明種SPF級(jí)雄性小鼠，共75只，體重（20±2）g，按體重隨機(jī)分為空白組（15只）和模型組（60只）。模型組頸背部皮下注射D-半乳糖，劑量為400 mg/k g/d，持續(xù)6周，建立衰老模型。然后模型組剪尾取血，并根據(jù)硫代巴比妥酸法（TBA法）所測(cè)紅細(xì)胞中丙二醛(MD

2、A)水平，將衰老模型組重新分組，隨機(jī)分為模型組（10 mL/k g/d雙蒸水灌胃）、干酪乳桿菌干預(yù)劑量1、2組（5、10 mL/k g/d干酪乳桿菌灌胃），維生素 E陽(yáng)性對(duì)照組（80 mg/k g/d維生素E灌胃）；正常對(duì)照組以10 mL/k g/d雙蒸水灌胃。除正常對(duì)照組外其余各組繼續(xù)頸背部皮下注射D-半乳糖，持續(xù)30天。最后一次灌胃后，用代謝籠收集小鼠糞便，用乙醚麻醉小鼠，采用摘眼球法取血，同時(shí)摘取肝臟和小腸。
　　2.抗氧化

3、指標(biāo)檢測(cè)：采用彗星電泳實(shí)驗(yàn)（單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)）檢測(cè)小鼠外周血中淋巴細(xì)胞DNA損傷水平，利用TBA法檢測(cè)小鼠紅細(xì)胞中MDA含量，DNPH比色法（2,4-二硝基苯肼法）檢測(cè)小鼠肝組織中蛋白質(zhì)羰基含量，DTNB法（二硫代二硝基苯甲酸法）檢測(cè)小鼠肝組織中GSH（還原型谷胱甘肽）含量及GSH-PX（谷胱甘肽過(guò)氧化物酶）活性。
　　3.腸道屏障功能檢測(cè)：利用透射電鏡觀察小鼠小腸黏膜組織超微結(jié)構(gòu)的變化，采用ELISA法檢測(cè)小鼠血清中D-LA（

4、D-乳酸）含量、DAO（二胺氧化酶）活性及FABP2（腸脂肪酸結(jié)合蛋白）含量。
　　4.腸道菌群含量檢測(cè)：采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)各組小鼠糞便中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌和腸球菌的含量。
　　結(jié)果：
　　1.與正常對(duì)照組相比，模型組淋巴細(xì)胞DNA損傷程度明顯升高(P＜0.05)；與模型組比較，干預(yù)劑量1、2組及維生素E組DNA損傷率明顯下降(P＜0.05)；與維生素E組比較，干預(yù)劑量1、2組DN A損傷情況無(wú)明顯

5、差異(P＞0.05)。
　　2.與正常對(duì)照組相比，模型組MDA及蛋白質(zhì)羰基含量均明顯升高(P＜0.05)；與模型組比較，干預(yù)劑量1、2組及維生素E組M DA及蛋白質(zhì)羰基含量均明顯下降(P＜0.05)；與維生素E組比較，干預(yù)劑量1、2組蛋白質(zhì)羰基含量降低(P＜0.05)，M DA含量無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　3.與正常對(duì)照組相比，模型組GSH和GSH-PX含量均顯著降低(P＜0.05)；與模型組比較，干預(yù)劑量1、2組G

6、SH含量顯著升高，干預(yù)劑量2組GSH-PX活性組顯著升高(P＜0.05)；與維生素E組比較，干預(yù)劑量1、2組GS H和GS H-PX含量均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　4.透射電鏡觀察顯示，正常對(duì)照組小腸黏膜結(jié)構(gòu)清晰完整，絨毛排列整齊緊密，細(xì)胞連接緊密；模型組小鼠小腸絨毛排列紊亂，部分倒伏脫落，細(xì)胞連接腫脹，橋粒數(shù)量減少；補(bǔ)充干酪乳桿菌及維生素E后，小腸絨毛及細(xì)胞連接狀況均較模型組明顯改善。
　　5.與正常對(duì)照組相比，模

7、型組D-LA、DAO及FABP2含量均顯著增高(P＜0.05)；與模型組比較，干預(yù)劑量1、2組及維生素E組D-乳酸含量、DAO活性及FABP2含量均顯著降低(P＜0.05)；與維生素 E組比較，干預(yù)劑量1、2組D-乳酸、DAO及FABP2含量均無(wú)明顯差別(P＞0.05)。
　　6.與空白對(duì)照組比較，模型組雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌含量均顯著降低(P＜0.05)；與模型組比較，干預(yù)劑量2組雙歧桿菌、乳酸桿菌含量升高，腸球菌含量降低