18015.草魚(yú)pkz的功能分析

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名(手寫)：刪2簽字日期：勿億年汐鑰／／日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全

2、了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽名：簽字曰期：年月日導(dǎo)師簽名：矧d

3、彭tj0“簽字日期：年月日摘要IUIIIllIIIlUlUIIIlY2142307摘要PKR1ike(PKZ)是近年來(lái)在鯽魚(yú)、斑馬魚(yú)(Daniorerio)、大西洋鮭(Salmosalar)、稀有觴鯽(Gobiocyprisrarus)禾l草魚(yú)(Ctenopharyngodonidella)中報(bào)道的一個(gè)蛋白激酶，由于其N端為ZDNA結(jié)合域(Z0【)，因此，將它命名為PKZ(proteinkinasecontainingZDNAbindi

4、ngdomain)。有趣的是，PKZ的C一端也具有12個(gè)保守的elF20t激酶催化域，與PKR(double—strandedRNAdependentproteinkinase)非常相似。初步研究表明PKZ與PKR非常相似，也與宿主細(xì)胞抗病毒有關(guān)。如魚(yú)類PKZ基因的本底表達(dá)非常微弱，當(dāng)干擾素等誘導(dǎo)后，表達(dá)上調(diào)。此外，與其elF20t激酶家族其他成員一樣，斑馬魚(yú)PKZ、大西洋鮭PKZ也能夠抑制細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成。盡管如此，對(duì)ZDNA如何調(diào)節(jié)

5、及激活魚(yú)類PKZ還不清楚?；诖耍覀兏鶕?jù)本實(shí)驗(yàn)室已克隆的草魚(yú)尸艘1ike(PKZ)(GU299765)，構(gòu)建了原核表達(dá)載體，并在體外進(jìn)行表達(dá)、純化。對(duì)所得草魚(yú)PKZ全長(zhǎng)蛋白進(jìn)行功能分析表明：原核表達(dá)的草魚(yú)PKZ本身就已經(jīng)被磷酸化了。以磷酸酶使之去自磷酸化后，PKZ就失去了激酶活性。我們還發(fā)現(xiàn)ZDNA可以使去白磷酸化的PKZ重新激活，然后磷酸化elF20t。而PolyI：C卻無(wú)法使之重新活化。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明：草魚(yú)PKZ能夠在翻譯水平上極大

6、地抑制熒光素酶的產(chǎn)生，說(shuō)明它能夠抑制蛋白質(zhì)的翻譯。其198位點(diǎn)突變后，幾乎完全失去阻礙翻譯的功能。此外，調(diào)節(jié)區(qū)Za的缺失對(duì)其功能也影響極大。另外，草魚(yú)PKZ啟動(dòng)子的序列分析表明其上存在干擾素調(diào)節(jié)因子I(IRF—1)的結(jié)合位點(diǎn)。基于此，我們利用原核表達(dá)的IRF一1的多肽與PKZ啟動(dòng)子序列進(jìn)行了瓊脂糖凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，IRF1可與PKZ啟動(dòng)子結(jié)合。這個(gè)結(jié)果為我們構(gòu)建真核表達(dá)載體，進(jìn)一步在體內(nèi)分析二者的結(jié)合情況，以及探索IRF一1調(diào)控草